基于体内过程分析的中西药注射剂联合序贯用药“时间窗”的探索性研究

The adverse reaction of the combination of Chinese and western medicine injection is increasingly serious. In order to avoid the injection-mix adverse reaction in vivo, physiological saline is used clinically between the two drugs only by experience, lack of corresponding clinical/laboratory research foundation, which may lead to potential safety problems. As one of the important topics in the clinical medication safety, reasonable combination time interval (" time window ") research are currently no worthy attention. Based on injection process analysis in vivo ascending "time window", UPLC-Q-TOF/MS & pattern recognition technology was applied in this project, to investigate the body composition and its dynamic change rule (serum fingerprint, eliminate curve, etc.) of Shuanghuanglian injection combined with ribavirin injection under different combination interval. According to the serum metabolic profile analysis of process information in the body of different combination interval, discriminant equation and initial time limit are supposed to be established to ensure the safety of the Chinese and western medicine injection sequential combination (threshold range), accompanied by combination evaluation in vitro, bio-response profile of living cells and pharmacology validation. In order to provide the basis for exploring "time window" research model and perfect the Chinese and western medicine injection combination specification.

中西药注射剂联用的不良反应日益严峻。临床上为了避免中西药注射剂联用产生不良反应，仅凭经验在两种药物之间输入生理盐水，缺乏相应的临床/实验研究基础，这或将导致潜在的安全性问题。合理的给药间隔时间（“时间窗”）研究作为减少中西药注射剂联用不良反应、指导临床安全用药的重要课题之一，目前并没有受到应有的重视。本项目以中西药注射剂的体内过程分析倒推“时间窗”为切入点，采用UPLC-Q-TOF/MS、模式识别技术，以双黄连注射剂与利巴韦林注射剂为研究对象,以单用组为对照，重点考察两药不同联用时间间隔下体内成分动态变化规律（血清指纹图谱、消除曲线等），根据血清代谢轮廓对比分析不同联用时间的体内过程信息差异，采用模式识别技术，初步确定中西药注射剂序贯联用“时间窗”（阈值范围），全程辅以活细胞指纹谱监测与药理学验证，以期为“时间窗”研究的模式探索、中西药注射剂联用的规范完善提供依据。

中西药注射剂联用的不良反应日益严峻。本项目旨在进行基于体内过程分析的中西药注射剂联合序贯用药“时间窗”的探索性研究。（1）建立中药注射剂（注射用双黄连、益气复脉冻干粉等）化学指纹图谱,建立了注射用双黄连生物热活性谱；（2）运用代谢组学分析方法，以双黄连注射剂与利巴韦林注射剂为研究对象,以单用组为对照，重点考察两药不同联用时间间隔下体内成分动态变化规律（血清指纹图谱、消除曲线等），根据血清代谢轮廓对比分析不同联用时间的体内过程信息差异，采用模式识别技术，初步确定中西药注射剂序贯联用“时间窗”（阈值范围）；（3）由于草药化学组成的复杂性，HDI的机制研究尚未解决，因此也难以预防。本项目建立基于网络药理学(NP)方法，尝试从草药-药物在生物网络协同作用的角度探讨HDI的可能机制。以临床不良反应多发的已知HDI组合-双黄连(SHL)与利巴韦林(RB)注射液为例，对比了“靶点重合target overlap”、“通路重合pathway overlap”、“通路汇聚pathway convergence”3种NP研究策略，结果表明“通路汇聚”策略预测出的凝血通路相互作用，即the草药(SHL)和the药物(RB)分别影响F2和VWF，对该HDI具有较好的可解释性。我们随后在大鼠上验证了这一HDI及预测结果：与正常对照组相比，单用SHL仅诱发较弱的类过敏反应，伴随血清F2含量显著上升（p<0.05）但未引起C5增加；单用RB未诱发类过敏反应，伴随血清VWF含量显著上升（p<0.05）但未引起C5增加；而SHL和RB联用时诱发了显著的类过敏反应，伴随血清F2、VWF以及C5含量同时显著上升（均p<0.05）；而采用拮抗剂阻断F2通路，SHL和RB联用组的类过敏反应和F2、VWF以及C5指标显著降低（均p<0.05），综合提示SHL和RB分别作用于F2和VWF并在下游通路汇聚引起协同作用，启动凝血通路与补体通路的级联反应，导致补体系统过度活化，最后诱发不良反应（类过敏反应）。基于所证实的F2和VWF通路汇聚结果，我们又反向预测了可能存在HDI的其他草药和药物。本项目的研究方法为阐明HDI的机制提供了一种新的生物网络协同作用的整体性视角和新策略。