密蒙花方防护早期糖尿病视网膜病变神经细胞损伤的作用及机制研究

长期以来，糖尿病视网膜病变（DR）研究的重点在于微血管病变。近年来的研究表明DR神经元的损伤发生在微血管改变之前，因此重视对视网膜神经细胞的防护对于早期DR的防治具有重要意义，目前相关研究尚处于初期阶段。本课题组长期采用中医药对DR进行防治，提出"心肾论治早期DR"的新思路，并在此新辨证思路的指导下创立密蒙花方，临床上取得良好疗效。在此基础上本课题拟以STZ性DM大鼠，大鼠视网膜神经节细胞，视网膜Muller细胞为研究对象，从在体动物实验，离体细胞实验两个方面，利用RT-PCR，Western blot,激光共聚焦，信号转导等技术，研究密蒙花方对早期DM大鼠视网膜神经细胞病变的保护作用，并从谷氨酸代谢，对Sigma受体的调控等方面探讨其防治DR早期视网膜神经细胞损伤的作用机理，为临床实践提供科学依据。

目的：通过在体及离体实验探讨中药密蒙花方防治DR早期视网膜神经损伤作用。方法：一、建立糖尿病大鼠模型，密蒙花方灌胃治疗，检测视网膜功能，形态学观察，检测视网膜谷氨酸含量，神经节细胞凋亡，视网膜GFAP、GS， GLAST, NMDA含量，视网膜Sigma-1R, BDNF，CNTFmRNA及蛋白水平。二、密蒙花方含药血清作用于高糖状态下的大鼠视网膜神经细胞，检测细胞增殖状态，细胞凋亡率，细胞超微结构，细胞内GFAP、GS，GLAST, NMDA含量。细胞内Sigma-1R ,BDNF，CNTFmRNA及蛋白水平。结果：一、1、模型组大鼠Ops、ERGb波随时间延长波幅逐渐降低，中药组较模型组OPs、ERGb波幅升高,有统计学意义。2.模型组视网膜结构紊乱，神经节细胞数目减少。中药组病理改变较模型组减轻。3．RGC凋亡：模型组较正常组RGC凋亡增加，中药组较模型组凋亡减少。4.视网膜谷氨酸含量：模型组较正常组含量增加，阳性组与中药组谷氨酸含量较模型组降低，有统计学意义。5.视网膜GFAP、GS， GLAST, NMDA含量：与正常组比，模型组GFAP、NMDA表达增强，GS、GLAST表达减少。与模型组比，中药组GFAP、NMDA表达减少，GS、GLAST表达增强。6.视网膜Sigma-1R, BDNF，CNTFmRNA及蛋白水平：模型组较正常组BDNF、CNTF 及Sigma-1R mRNA及蛋白水平降低。中药组较模型组BDNF、CNTF 及Sigma-1R mRNA及蛋白水平升高。二、1.高糖状态下，RGC增殖受到抑制，Muller细胞反应性增生，含药血清具有促进RGC增殖，抑制Muller细胞增生作用。2.高糖下，RGC凋亡增加，Muller细胞凋亡降低，中药组较模型组RGC凋亡降低，Muller细胞凋亡率高。3.高糖下Müller细胞GFAP、NMDA表达升高，GS、GLAST表达降低，中药组较高糖组GFAP、NMDA表达降低，GS、GLAST表达升高。4、细胞内Sigma-1R,BDNF，CNTF含量：高糖组较正常组BDNF、CNTF及Sigma-1R mRNA及蛋白水平降低。中药组较高糖组BDNF、CNTF 及Sigma-1R mRNA及蛋白水平升高。结论：DR视网膜神经损伤发生在微血管之前，密蒙花方可抑制DR早期视网膜神经损伤。