LASP1调控新机制：靶向激活AKT2/MAPK信号通路促进鼻咽癌转移的研究

Distant metastasis is the leading cause of death in patients with nasopharyngeal carcinoma (NPC). LASP1 was screened from Genechip analysis and played important role in promoting metastasis in NPC. Our previous study indicated that: ①LASP1 was highly expressed in metastatic NPC tissues and cell lines, which also predicted poor prognosis. ②LASP1 promoted metastasis by inducing epithelial mesenchymal transition (EMT) in NPC. ③ Based on the results of expression profile analysis, protein detection and protein interaction relations, we put forward the scientific hypothesis: LASP1 targetedly binds AKT2 to activate MAPK signaling pathway independent of PI3K, which induce EMT to promote metastasis in NPC. To elucidate the mechanism: ① We will estabilish point mutation plasmids of four domains of LASP1 to explore the direct biding site between LASP1 and AKT2. ② The AKT2 / MAPK signaling pathway as the mechanism clue, we will verify the new mechanism that LASP1 targetedly binds AKT2 to activate MAPK signaling pathway independent of PI3K. This study is rooted in clinical problems and we proposed new mechanisms of LASP1 in regulating nasopharyngeal carcinoma metastasis, our investigation has important clinical value and might provide new therapeutics target for metastatic nasopharyngeal carcinoma.

远处转移是导致鼻咽癌患者死亡的主要原因，LASP1是申请人利用基因芯片筛选并验证为重要的促鼻咽癌转移分子。前期结果示①LASP1在转移性鼻咽癌组织及细胞呈高表达，且提示不良预后；②LASP1通过诱导鼻咽癌细胞发生上皮间质转变而促进转移；③基于表达谱分析、蛋白检测及蛋白相互作用的探索，结合文献提出科学假说：LASP1非依赖PI3K靶向结合AKT2激活MAPK信号通路诱导鼻咽癌细胞发生上皮间质转变而促进转移。进一步采用过表达/沉默策略行以下机制探讨：①对LASP1的四个结构域分别进行定点突变，探索LASP1与AKT2直接结合靶点；②以AKT2/MAPK信号通路为主线，通过挽救实验策略，系统论证LASP1非依赖PI3K靶向激活AKT2/MAPK信号通路这一新的分子机制。本课题源于临床问题且提出LASP1调控鼻咽癌转移新机制，具有重要临床价值的同时具有创新性，为鼻咽癌转移防治提供新思路和治疗靶标。

鼻咽癌是高发于中国、东南亚及北非的鼻咽上皮恶性肿瘤，其中约40%发病于中国。鼻咽癌主要治疗策略是基于TNM分期的放化综合治疗，近年来随着放疗技术及设备的不断进步，鼻咽癌患者5年生存率较前提高，但影响鼻咽癌患者疗效并导致死亡的主要原因仍是远处转移。鼻咽癌远处转移2年生存率<10%，中位生存时间不足10个月，其中以内脏转移预后最差，一旦出现内脏转移，鼻咽癌患者病程明显缩短，呈迅速恶化趋势。因此，寻找在鼻咽癌转移过程中起关键作用的基因并阐明其分子机制，为鼻咽癌转移的诊治提供有效靶标一直是鼻咽癌研究领域的重中之重。申请人为筛选与鼻咽癌转移相关基因，选取3例明确诊断为“鼻咽癌T1N0M0”的原发灶组织，同时利用CT引导下细针穿刺获取3例诊断为“鼻咽癌伴肺转移”的肺转移灶组织，对六例组织标本进行高通量基因芯片分析。发现LASP1在鼻咽癌细胞及组织中高表达水平稳定：①LASP1在鼻咽癌细胞株中表达明显高于鼻咽永生化细胞及原代培养的鼻咽上皮细胞，且在鼻咽癌高转移细胞株5-8F中表达最高；②LASP1在鼻咽癌组织中的表达明显高于正常鼻咽组织，且鼻咽癌伴远处转移患者的表达水平明显高于非转移患者；③LASP1高表达与总生存与无远处转移生存呈负相关。以上结果提示 LASP1 高表达在鼻咽癌伴远处转移的患者中普遍存在并预示不良预后。功能试验证实LASP1能够通过诱导鼻咽癌细胞发生上皮间质转变而增强转移能力。机制上证明LASP1非依赖PI3K靶向结合AKT2，激活MAPK信号通路诱导鼻咽癌细胞发生上皮间质转变而促进鼻咽癌转移。本研究初步证实LASP1在鼻咽癌促转移中作用新机制，且本课题源于临床疑难问题的思考与研究，因此本研究具有重要的临床价值，且具有一定创新性。本研究有助于阐明LASP1在鼻咽癌转移中新的分子机制，为理解LASP1诱导鼻咽癌细胞发生上皮间质转变促进其转移提供新的思路，更为鼻咽癌伴远处转移患者的防治提供新线索和潜在的干预靶标。