基于网络药理学原理的腧穴“降压方”配伍规律及生物学机制研究

This project takes network pharmacology into the combination of acupoints and finds the best acupoints prescription"Jiang Ya Fang” .After using electron microscopy, immunohistochemistry, in situ hybridization, Western blot methods and electrophysiological technique to observe the change of ultrastructure of vascular smooth muscles, calcitonin hormone gene related peptide (CGRP) and glutamic acid decarboxylase (GAD) expression, NO/ ET, ACE, angiotensin II neurotransmitters, the activity of hypothalamus and medulla oblongata nuclei, to explore the mechanism of antihypertensive effect through neurohumoral regulation, and then to reveal the modern science prescription regulations of "Jiangya Fang" , and also to establish the theoretical basis and research platform for other acupoints compatibility, and last to provides a new thinking for creating scientific and systematic acupoints compatibility theory.

本项目将网络药理学引用到腧穴配伍中，通过网络拟定最佳配伍腧穴 “降压方”，运用电子显微镜、免疫组化、原位杂交、Western blot及电生理等技术，通过对血管平滑肌超微结构、NO/ET、ACE、ATⅡ等递质的影响，从降钙素基因相关肽（CGRP）与谷氨酸脱羧酶(GAD)的表达、下丘脑与延髓有关核团的神经元活动角度，对降压的神经体液调节机制进行探讨，阐明腧穴组方对血压保护机制及其针刺信号传导途径与整合的机制。目的在于揭示腧穴“降压方”的配伍的现代科学配伍规律，为其他领域腧穴配伍奠定理论基础和研究平台，也为创立科学而系统的腧穴配伍理论（针灸处方学）提供新的思路。

本项目将网络药理学原理应用到腧穴配伍中，筛选出最佳配伍腧穴“降压方”，并与其他降压单穴及多穴组方进行降压效应比较，并观察了“降压方”对血管舒缩相关活性因子ACE、ET-1、AngII、NO、CGRP的调节作用。再进一步研究腧穴“降压方”的降压机制及心脑血管保护作用。血管方面主要检测各组主动脉HE形态学、马松胶原染色、电镜超微结，结合结构相关的profilin1免疫组化蛋白表达、profilin1mRNA表达、血清MMP9、TIMP-1，及炎症相关因子MCP-1、TNF-α、IL-6，说明“降压方”抑制主动脉重塑作用。心脏方面，从超声、心肌质量指数、心肌细胞HE形态学及马松胶原染色及凋亡角度，结合心肌肥厚标志物ANPmRNA和β-MHC mRNA，氧化应激ROS、SOD、GSH-PX、NOX2、NOX4 mRNA、，心肌炎性因子MCP-1、TNF-a、IL-6、MMP9，心肌凋亡因子TLR4、Myd88、NF-κB、BCL-2蛋白和BAX蛋白表达方面，阐述“降压方”抑制心脏保护作用。神经调节方面，基于外周神经，得出“降压方”科改善交感激惹症状同时降低肾交感神经传出。结合网络药理方法IPA得出的针刺核心通路“神经炎症”(JNK、NMDAR)，研究针刺“降压方”抑制外周肾动脉及中枢室旁核区p-JNK-MCP1通路作用。同时，中枢方面，“降压方”能抑制PVN区NMDAR1相关的谷氨酸能、去甲肾上腺素能神经递质及其转运蛋白和受体表达，上调NMDAR1内源性拮抗性介质KYNA水平，发挥抑制Glu-NMDAR1相关的谷氨酸能紧张性传入作用。本研究揭示网络药理学方法筛选腧穴“降压方”有一定有效性及科学性，为其他系统的腧穴配伍理论（针灸处方学）提供新的思路。