肝脂肪变性中AAT失代偿在重症急性胰腺炎的作用及相关分子机制

Hepatic steatosis, as a independent risk factor for sever acute pancreatitis, can exacerbate the process of acute pancreatitis. However, its mechanism is still unclear. AAT(Alpha-1-Antitrypsin)is referred to as a proteinase inhibitor, which is a acute phase reactant that is synthesized by hepatic cell. It protects tissues and organs from enzymes and maintain the environment balance in vivo. We found that AAT were significantly decreased in acute pancreatitis with hepatic steatosis using proteomic skills. Whether hepatic steatosis that caused by AAT decompensation accentuate the process of pancreatitis or not? In our project, based on our previous data, we try to address the relation between AAT and SAP when patients were with hepatic steatosis, and the pancreatin is overly activated. Using cell model and high throughput sceening technology, we try to find out the AAT changes signal pathway caused by fatty degeneration of the liver in acute phases. By interference technique, blocking its possible pathyway reduces the effect of hepatic steatosis on SAP in rats. This project can preliminary figure out the mechanism about exacerbating the process of acute pancreatitis by hepatic steatosis, and provide theoretical basis for the treatment of SAP patients complicated with fatty liver.

肝脂肪变性作为重症急性胰腺炎独立的危险因素之一，其加重胰腺炎的机制尚不清楚。胰蛋白酶抑制剂AAT(Alpha-1-Antitrypsin)是肝细胞合成的一种抗炎症的急性期反应物，主要作用是保护机体正常细胞和器官不受蛋白酶的损伤，维持机体内环境的平衡。我们利用蛋白组学发现在急性胰腺炎发生时，肝脂肪变性患者的AAT明显降低。是否肝脂肪变性引起AAT失代偿是加重胰腺炎的发病机制？本课题将在上述工作基础之上，通过血清标本证实在急性胰腺炎发生时，肝脂肪变性时AAT合成分泌的变化与重症急性胰腺炎病程密切相关，且胰酶过度活化；利用细胞模型以及高通量筛选肝脂肪变性在急性反应期引起AAT变化的信号通路；通过干扰手段研究阻断其可能的通路降低肝脂肪变性对重症急性胰腺炎的影响。通过本研究可初步证明肝脂肪变性加重重症急性胰腺炎可能机制，并为重症胰腺炎合并脂肪肝患者治疗提供理论依据。

（一）研究背景：肝脂肪变性作为急性胰腺炎（AP）独立的危险因素之一，其加重胰腺炎的机制尚不清楚。胰蛋白酶抑制剂AAT(Alpha-1-Antitrypsin)是肝细胞合成的一种抗炎症的急性期反应物，主要作用是保护机体正常细胞和器官不受蛋白酶的损伤，维持机体内环境的平衡。我们利用蛋白组学发现在急性胰腺炎发生时，肝脂肪变性患者的AAT明显降低。是否肝脂肪变性引起AAT失代偿是加重胰腺炎的发病机制？本课题将在上述工作基础之上，通过血清标本证实在急性胰腺炎发生时，肝脂肪导致AAT合成分泌的变化与重症急性胰腺炎病程密切相关；利用高通量（RNA-seq）技术筛选脂肪肝加重胰腺炎的信号通路；通过本研究可初步证明肝脂肪加重急性胰腺炎可能机制，并为胰腺炎合并脂肪肝患者的治疗提供理论依据。.(二)研究内容：第一部分---脂肪肝在大鼠急性胰腺炎中降低AAT水平；第二部分---利用临床病人血清验证肝脂肪变性时AAT变化与AP的病程关系；第三部分---利用RNA-seq技术比较脂肪肝胰腺炎（HSAP）与非脂肪肝胰腺炎（NHSAP）发病机制的异同。.（三）数据结果：.1. 我们成功建立了HSAP与NHSAP大鼠模型，二维凝胶电泳和质谱鉴定AAT为两组间差异表达的蛋白之一。通过ELISA和免疫组化进一步证实了AAT在HSAP组的表达量与NHSAP组相比明显下降，说明脂肪肝大鼠在发生胰腺炎时血清中AAT处于失代偿状态。.2. 通过ELISA检测健康对照组（NC）、脂肪肝组（FLD）、非脂肪肝胰腺炎组（NHSAP）和脂肪肝胰腺炎组（HSAP）4组病人血清中AAT的含量，结果提示NHSAP组与NC组相比，血清AAT水平显著上升；而HSAP组血清AAT水平与NHSAP组相比显著下降，APACHE-II 评分和HSAP病人血清AAT 水平呈负相关。脂肪肝病人发生胰腺炎后AAT的合成处于失代偿状态，脂肪肝导致的AAT下调会加重胰腺炎病情。.3. RNA-seq结果显示脂肪肝可能通过WNT信号通路，胰岛素受体通路加重急性胰腺炎的病程，而且炎症相关通路，PPAR信号通路以及脂肪酸代谢信号通路共同参与到了APFL和AP的病理过程中，qRT-PCR的结果验证了这一结论。.(四)科学意义：本研究中我们证明了脂肪肝可以明显降低急性胰腺炎病人血清中AAT的含量，且AAT的下降程度与病情严重程度有一定相关性。