microRNA-320a靶向TIAM1抑制大肠癌肝转移的机制研究

本课题组拟用miRNAs过表达和miRNAs海绵技术分析离体情况下，miR-320a对大肠癌细胞的增殖、失巢凋亡、迁移、侵袭和细胞周期的作用。拟用miRNAs过表达和miRNAs海绵技术分析在体情况下，miR-320a对大肠癌细胞迁移、侵袭、肿瘤血管形成和肝转移的影响。采用染色体免疫共沉淀分析miR-320a表达调控的分子机制，明确miR-320a基因上游的转录因子结合位点。采用有随访资料的大肠癌组织标本为研究资料，检测miR-320a和靶基因TIAM1的表达情况，分析其表达与临床病理特征和预后的关系。藉此，揭示大肠癌中miR-320a的功能和基因转录调控的机制，明确miR-320a表达异常与大肠癌侵袭转移之间的因果关系，阐明miR-320a在大肠癌肝转移中作用的分子机制，为临床更好地预警大肠癌肝转移和判断预后，提供新思路和新方法。

MicroRNAs(miRNAs)能够调节多种细胞通路，虽然有证据显示在大肠癌中一些miRNAs是原癌基因或者抑癌基因，miRNAs介导肝转移的作用还不清楚。利用miRNAs芯片分析miRNAs在结肠原发癌和肝转移组织中的表达谱，筛选差异表达的miRNAs，并用实时定量PCR验证。检测miR-320a在62例大肠癌组织中的表达水平，利用transwell 小室实验来检测miR-320a的迁移和侵袭；使用荧光素酶活性分析、实时定量PCR以及western blot来确定miR-320a的靶基因，miR-320a 在肝转移组织中表达明显下调， miR-320a 和肿瘤进展有明显相关性；MiR-320a抑制结肠癌细胞的迁移和侵袭；miR-320a直接作用于neuropilin 1 的3’UTR区，neuropilin 1 是 VEGF的共受体。 miR-320a 下调NRP-1 mRNA 和protein 水平的表达。这些研究结果提示 miR-320a可能是预测结肠癌肝转移的有力的标志物。该实验结果已经发表一篇SCI论文。