蛋鸡脂肪肝出血综合征肝脏差异蛋白质组学研究

Fatty liver hemorrhagic syndrome (FLHS) is an avian nutritional and metabolic disease. FLHS is characterized by increased hepatic triacylglycerol content associated with liver hemorrhages, results in a sudden decline in egg production and causes great economic losses in poultry production. However, the molecular pathogenesis of FLHS is still unknown so far, suggesting that it's more important if there is some diagnosis biomarker. In this study, Hanlan layer hens will be employed to create disease model of FLHS by giving high energy/low protein diet. Subsequently, the profiles between whole proteins and phosphorylation proteins in the liver in the development of FLHS will be dynamically analyzed using 2-dimensional polyacrylimade gel electrophoresis (2D-PAGE) in combination with western blotting of specific anti-phosphotyrosine. Then the proteins or phosphorylation proteins detected will be annotated their biological functions by querying against the protein function database and the proteins interaction network will be constructed so as to identify a series of proteins which are related to carbohydrate metabolism, lipids metabolism and signal transduction. These results will be benficial to understand the pathogenesis of FLHS. At the same time, the findings will provide basic research data and a new rode for preventing FLHS so as to promote the poultry production.

蛋鸡脂肪肝出血综合征（FLHS）是一种营养代谢性疾病，主要特征为肝脏脂肪过度沉积，蛋鸡产蛋率显著下降，给蛋鸡养殖业造成严重的经济损失。然而其发病机制迄今尚不明确，所以探讨FLHS的分子病理机制对FLHS的早期诊断和防治具有重要意义。因此，本研究拟以海兰蛋鸡为试验对象，采用高能低蛋白日粮建立FLHS疾病模型；然后运用双向凝胶电泳（2D-PAGE）并结合酪氨酸磷酸化western-blot技术建立FLHS发生发展过程中FLHS患鸡和正常健康蛋鸡之间肝脏动态的蛋白质表达谱和酪氨酸磷酸化蛋白修饰谱，筛选出差异表达的蛋白质并进行质谱分析；同时应用生物信息学技术对差异表达的蛋白/磷酸化蛋白进行功能注释及网络构建，以发掘涉及禽类体内糖和脂类代谢网络途径及其代谢调节的一系列蛋白质，进而从分子水平上揭示FLHS可能涉及的病理分子路径，同时为寻找FLHS特异性诊断及治疗方法提供理论依据。

蛋鸡脂肪肝出血综合征（FLHS）是一种营养代谢性疾病，主要特征为肝脏脂肪过度沉积，蛋鸡产蛋率显著下降，给蛋鸡养殖业造成严重的经济损失。然而其发病机制迄今尚不明确，所以探讨FLHS的分子病理机制对FLHS的早期诊断和防治具有重要意义。.本研究以海兰蛋鸡为试验对象，采用高能低蛋白日粮建立FLHS疾病模型。解剖肝脏外观发现，对照组蛋鸡的肝脏颜色正常，呈暗红色，而实验组蛋鸡的肝脏较对照组颜色均偏黄，且随饲喂时间的延长肝脏发黄程度逐渐加深，部分肝脏有出血点；实验组肝脏指数显著高于对照组。生理生化指标测定结果显示：实验组肝脏脂肪含量显著高于对照组；实验组蛋鸡的血清甘油三酯（TG）含量均极显著高于对照组，实验组蛋鸡的血清总胆固醇（TC）含量与对照组相比显著或极显著升高；实验组蛋鸡的血清低密度脂蛋白胆固醇（LDL-Ch）含量与对照组相比，在第80d和100d时显著升高；观察肝脏组织石蜡切片发现，每个时间点对照组蛋鸡的肝脏微观结构正常，肝小叶及肝细胞界限清晰，细胞质均匀且极少或未出现空泡结构，实验组肝脏细胞则出现较多空泡，且随着饲养时间延长，空泡数量逐渐增多，大小逐渐增大；以上结果表明FLHS病理模型成功建立。.iTRAQ (Isobaric tag for relative and absolute quantitation，iTRAQ）是 一种体外同重同位素标记的相对与绝对定量技术。本项目运用iTRAQ技术筛选FLHS发生发展过程中FLHS患鸡和正常健康蛋鸡之间肝脏差异表达蛋白及差异表达磷酸化蛋白：共有3579个蛋白被鉴定，和对照组相比，筛选到310个差异表达蛋白，其中162个蛋白表达上调、148个蛋白表达下调；共有957个蛋白的1481个磷酸化位点被定量，和对照组相比，筛选到166个差异表达的磷酸化蛋白，其中113个蛋白表达上调、53个蛋白表达下调；同时应用生物信息学技术对差异表达的蛋白/磷酸化蛋白进行功能注释及网络构建，结果表明：差异蛋白主要涉及能量生成、脂类的转运与代谢等功能，且富集PPAR、Wnt及MAPK等禽类体内糖和脂类代谢通路及代谢调节网络；以上结果为寻找FLHS特异性诊断及治疗方法提供理论依据。