吲哚胺2-3双加氧酶基因防治卵巢移植排斥反应的实验研究

Allogeneic ovarian transplantation is a issue that set for a long time,due to immunological rejection.In order to prevent and treat the graft rejective reaction,and to restore the function of transplanted ovary, gene therapy with indoleamine 2,3- dioxygenase(IDO) is used in animal model of allogeneic ovarian transplantation.The main research contents are organized as the following: (1) Donors' ovaries with their arteries and veins attached are treated with recombinant adenovirus or lentivirus containing IDO gene; (2)The ovarian artery and vein of donor anastomose with the aorta and cava below the left renal artery of recipient respectively;(3) The function of transplanted ovary is monitored and the relationship among the expression of IDO in tissue of transplanted ovary, the function of transplanted ovary, and the graft rejective reaction is analysed. The main aim of the programme is to screen immunosuppressive molecules wich can induce graft tolerance,prevent transplant rejection and reduce graft cell death.

同种异基因卵巢移植因免疫排斥反应而被长期搁置。在长期研究吲哚胺2-3双加氧酶( IDO)的基础上，本项目组成员拟通过动物实验，试图用IDO基因治疗来防治同种异基因卵巢移植所致的排斥反应，恢复已移植的卵巢的生殖和内分泌功能。具体的研究内容包括（1）含IDO 基因的重组腺病毒或慢病毒处理带蒂的供体卵巢；（2） 吻合血管的同种异基因卵巢移植；（3）监测移植卵巢的功能，分析移植卵巢组织中IDO的表达与移植排斥反应和卵巢功能恢复的关系。希望通过本项目的研究为同种异基因卵巢移植筛选出能够提高免疫耐受、降低排斥反应和减少移植物细胞死亡的免疫抑制分子。

目的:通过动物实验，用IDO酶的基因来防治同种异基因卵巢移植所致的排斥反应，恢复移植卵巢的生殖和内分泌功能。方法:1.选取9-11周龄的Lewis雌性大鼠进行自体移植（A组）；同种异体移植选取9-11周龄的Lewis雌性大鼠作为供体，同龄的SD雌性大鼠作为受体，随机分为4组：B组（空白对照组）、C组（环孢素A组）、D组（含IDO基因的重组慢病毒组）、E组（空慢病毒组），按组序给予不同处理，观察术后各组大鼠的存活情况，比较各组大鼠移植卵巢的成功率、受孕情况及FSH、E2的水平。2. 比较术后各组受鼠移植卵巢的组织学检查结果、病理检查结果及移植卵巢组织排斥反应程度；3.术后将D组和E组的新鲜卵巢组织快速冰冻切片，荧光显微镜下观察病毒的感染情况，用免疫组化方法检测术后各组受鼠移植卵巢组织中IDO的表达情况。结果：1.术后各组受鼠的存活率及移植成功率比较，D组明显高于B组和E，与A组比较无明显差异。2.术后 A 组、B组、C组、D组分别有4只、2只、3只、4只大鼠自然受孕并分娩，而E组未受孕。3.术后40天， D组的FSH水平明显低于B组、C组、E组，D组的E2水平明显高于B组、C组、E组，但与A组比较无明显差异；术后70天，D组的FSH及E2水平与其他4组比较无显著性差异。3.术后B组、E组卵巢组织间见少量卵泡及黄体，C组卵泡及黄体数量较B组、E组稍多，A组、D组见中等量发育卵泡及黄体；术后 D 组及E组行新鲜组织快速冰冻切片，荧光显微镜下观察可见大量的绿色荧光。4.术后移植卵巢的病理切片结果显示： D组内炎症细胞较C组炎症细胞少，最接近自体卵巢移植组；7. IDO在移植卵巢中表达的位置主要在黄体及卵泡细胞浆中，D组中IDO表达最强，均高于其余4组。结论：1.重组慢病毒携带的 IDO基因能成功地感染染大鼠的移植卵巢，并在一段时间内，能在移植卵巢中稳定表达。2.初步证实了IDO的表达可能会提高同种异体卵巢移植的成功率，同时可部分恢复移植卵巢的生殖和内分泌功能。