供者单核巨噬细胞在脐血移植后植入前综合症发病机制中的研究

Pre-engraftment syndrome ( PES ) was found as a high immue response following cord blood transplantation ( CBT ) in recent years. Severe PES patients can be life threatening in contrast to the mild may reduce recurrence rate and improve survival rate, but the pathogenesis is unclear.According to our center pre-experimental results and the clinical manifestations of PES, we infered that the major effector cells of PES are donor monocyte-macrophages.We propose to collect blood and defecate sample of patients with PES to inspect cell phenotypes .We will also validate that donor monocyte-macrophages are the key effector cells at activated cytokines level. Using HiSeq high-throughput sequencing technique of microRNA, we can screen differentially expressed miRNAs from PES. From these miRNAs targeting genes and their regulatory function proceeding with, we can find the corresponding signal transduction pathway so in the molecular level to elucidate the pathogenesis of PES. If we can get the expected results, we will not only provide experimental basis in the PES study, at the same time, systematically expound PES pathogenesis but also provide theory foundation to clinical treatment.

植入前综合症（PES）是近年来被发现在脐血移植（CBT）术后高发的免疫反应，重症PES患者可危及生命而轻症者复发率下降，生存率得到提高，但发生机制不清楚。我们前期研究发现供者来源的单核巨噬细胞可能参与CBT后PES的发病。本项目拟检测CBT后发生PES伴腹泻患者外周血和大便中细胞和细胞因子，从细胞及分泌的活性因子水平上揭示单核巨噬细胞在PES发病中的关键作用；采用高通量miRNA测序技术，筛选出PES患者差异表达的miRNA，从编码这些差异表达的miRNA调控的靶基因功能入手，找到相对应的信号传导通路，从分子水平上阐明PES的发病机理；最后通过清除单核巨噬细胞的移植动物模型，验证单核巨噬细胞对PES发生的影响，从而阐明PES发生的免疫机制，为研究CBT后诱导移植物抗白血病效应提供新的思路和途径，指导临床针对性的干预，解决临床急待解决的问题。

目的：探讨恶性血液病患者采用非血缘非血缘脐血移植（UCBT）后发生植入前综合征（PES）的主要效应细胞，并初步研究其发病机制。方法：选择白血病经清髓性单份UCBT治疗的患者，留取移植前、发生PES时和治疗后PES症状控制时的标本，采用多色流式细胞技术和ELISA方法检测血清样本中单核巨噬细胞、T细胞和NK细胞相关系列细胞因子；采用TruSeq Rapid SBS Kits在Illumina HiSeq 2000上对血清中miRNA测序，筛选出差异表达的miRNA，通过mirbase、miranda、targetscan数据库做靶基因预测+GO+Pathway分析。结果：① 26例发生PES的UCBT患者血清中单核巨噬细胞相关的因子MCP-1、IL-1B、IL-6、IL-18较移植前显著增高（p<0.01），也显著高于同期的6例未发生PES的UCBT患者（p<0.01），当PES患者症状控制后细胞因子水平下降到发生PES前的水平；而血清中T细胞相关的细胞因子Th1、Th2、Th17和NK细胞分泌的相关的细胞因子与未发生PES对照组相比均无明显差别（p>0.05）；2例发生PES患者的大便中IL-1B、IL-6、TNF-a、IL-17均明显高于外周血；②UCBT后患者发生PES时血清补体C3a、C4a、C5a水平与未发生PES对照组相比无显著差别（p>0.05）；③UCBT后患者发生PES时外周血中的T细胞、NK细胞比例及NK细胞相关功能抗原CD11b、CD27、CD57与未发生PES对照组相比无明显差别；④ 对3例接受单份UCBT的患者移植前、PES发生时、PES症状控制后的9份血清标本进行miRNA测序，结果显示差异表达的miRNA有hsa-let-7i-5p、hsa-mir-98-5p、hsa-mir-152-3p、hsa-mir-223-3p等39个，通过靶基因预测+GO+Pathway分析，推测出PES的发生与单核巨噬细胞的激活相关的三条信号通路：Toll、NOD、RIG-I样受体信号通路可能相关。结论：初步证实单核巨噬细胞是引起PES发生的效应细胞，分子水平上预测可能通过激活Toll、NOD、RIG-I样受体三条信号传导通路而发挥作用，为深入研究PES的发病机制提供了方向和可靠的实验室依据。