基于TLRs靶标研究三棱特征成分的抗炎活性及分子机制

阻断Toll受体(TLRs)信号是防治非可控性炎症疾病的重要靶标。基于中医药理论和临床经验及课题组多年对破血消癥中药三棱的前期研究，发现其新型异香豆素（NIC）化合物SsnB通过阻断TLR2和TLR4靶点，显示出很强的抗炎作用。提出NIC成分是三棱治疗非可控性炎症疾病发挥优势的特征成分。本课题拟采用现代分离分析手段和生物效应评价方法，围绕血瘀证病理生理特点，以TLR2和TLR4为靶标，研究三棱NIC成分抗炎活性和对TLR2和TLR4选择性抑制作用，研究其体内代谢和代谢物抗炎活性，从多角度阐明其抗炎分子机制。本项目研究将有可能揭示破血消癥中药的独特抗炎活性和共同作用机制，为发现高效低毒选择性TLR2和TLR4阻断剂提供科学依据。

抗炎与活血化瘀密切相关，阻断Toll 受体(TLRs)信号是防治非可控性炎症疾病的重要靶标。本项目研究破血消徵中药三棱新型异香豆素类（NICs）等特征成分及其体内代谢物的抗炎活性和选择性抑制TLRs信号通路的作用机制等。.从三棱中分离鉴定化合物近40个，含7个新化合物，28个首次分离，包括NICs类、茋类等三棱特征成分。对分离到的NICs成分SsnB及其衍生物进行结构修饰，获得10个修饰产物，含9个新化合物。体外抗炎研究表明三棱特征成分及NICs修饰物有抗炎活性，其中三棱NIC抗炎活性强，结构修饰的开环物和异喹啉酮化物抗炎活性比原反应物提高，酚羟基数目增加抗炎活性增强。三棱特征成分及多个NICs结构修饰物对TLR2或TLR4配体刺激的细胞炎性反应都有选择性抑制作用，而对其他TLRs配体诱导的炎性反应物无影响。而含多种抗炎特征成分的三棱抗炎部位AF显著抑制内毒素小鼠炎症损伤，提高小鼠存活率，且AF含抗炎成分占51.95%; AF还能明显降低小鼠脑出血后的炎症损伤。.SsnB是一个选择性TLR2和TLR4拮抗剂,深入研究显示：1）SsnB明显抑制巨噬细胞炎症反应，显著提高内毒素小鼠存活率，降低小鼠炎症损伤；2）SsnB能抑制HUVECs细胞炎症反应，减少单核细胞粘附于内皮细胞，抑制LPS诱导的HUVECs Erk1/2和Akt蛋白的激活；3）SsnB显著提高Hb诱导小胶质细胞损伤的神经元存活率，剂量依赖地抑制Hb刺激的小胶质细胞TLR2和TLR4二聚体形成，显著降低转染了TLR2和TLR4的HEK293细胞受Hb刺激后NF-κB表达，但不影响仅转染了TLR2 或TLR4的细胞表达NF-κB。SsnB静脉给药能显著降低由自体血诱导的脑出血小鼠神经功能缺失评分，减轻脑水肿，降低脑组织的炎性蛋白表达。.比较灌胃和尾静脉注射SsnB在大鼠体内的含量变化，获得SsnB的药代动力学参数。总结了SsnB在大鼠体内的代谢转化规律, 通过对SsnB的化学修饰，获得血液中的部分代谢物，发现这些代谢物有抗炎活性。.本项目揭示了三棱中NICs等特征成分通过选择性抑制TLR2和TLR4信号通路而发挥其独特抗炎作用，为开发SsnB治疗心脑血管等疾病的新药或先导物奠定了科学基础..已发表论文14篇，其中SCI收录8篇，获国家授权发明专利5个。