类风湿关节炎新的特异性自身抗原的筛选及其致病作用的研究

Rheumatoid arthritis (RA) is a systemic autoimmune disease of unclear etiology, characterized by chronic joint inflammation which eventually leads to progressive joint destruction and consequent disability. RA imparts a massive burden on health services worldwide. Early diagnosis and treatment of RA is crucial in preventing irreversible joint damage. Thus, a search for biomarkers that improve early identification is of utmost importance. Phage-displayed random peptide library is a high-throughput screening of peptide biotechnology widely used in epitope group study.In our previous work, IgG was purified from serum of 10 patients with RA and was used as the ligand for biopanning of a phage-displayed random display 12 peptides library. The positive phage clones were obtained through three rounds of biopanning, and the identity of DNA sequence and amino acids were analyzed．As a result, we found a novel serologic marker that was present in most patients with RA. The antibody against the novel peptide was highly specific and sensitive for patients with RA. The aim of this study was to identify potential serologic markers of RA, evaluate the diagnostic efficiency of antibodies against the synthetic peptide sequence according to the positive clone and reveal the possible mechanism using the biological strategies successfully applied in other autoimmune diseases.

类风湿关节炎(RA)是以滑膜炎及骨破坏为特征的慢性致残性疾病，本病的病因不明，缺乏理想的早期诊断及治疗的方法。筛选新的特异的RA疾病标志物并研究其在发病中的意义，是进一步揭示RA发病机制并寻找新的诊断及治疗方法的重要途径。自身抗原在RA发病过程中具有重要作用，但由于RA相关抗原众多，结构不清，研究难以深入。噬菌体表面展示随机肽库技术是一种高通量筛选功能性多肽的生物技术，恰好能克服这一障碍，已广泛应用于未知结构抗原表位组学研究。本课题组利用噬菌体随机12肽库技术，筛选到与RA血清IgG特异性结合的多肽序列，并初步证实该多肽在RA中的敏感性及特异性均>90%，本课题将在前期工作基础上，进行多肽及自身抗原的进一步鉴定及机制研究，这些新型RA特异性多肽和自身抗原的鉴定为本课题组首次发现，具有极高的创新性，有望获得自主知识产权，在此基础上建立的RA早期诊断方法将使RA早期诊断水平取得突破性进展。

类风湿关节炎（RA）是一种以慢性侵蚀性关节病变为主要病理改变的自身 免疫病。其发病机制不明，缺乏早期诊断标志物，且无根治性治疗方法。因此， 探讨 RA 发病机制、研究 RA 早期诊断的生物标志物，探索更有效的 治疗手段，是提高 RA 诊疗水平的关键。本研究应用噬菌体肽库展示技术，经克隆鉴定及序列测定，确定了一个新的抗原表位，命名为RAP。以合成的多肽 RAP偶联 KLH免疫动物，可有效缓解胶原诱导关节炎病情。此外，应用Orbitrap 高分辨质谱技术，共发现13种含有未报道过的瓜氨酸化位点的蛋白，其中瓜氨酸化脂多糖结合蛋白在RA中具有重要作用。本课题组还应用纳米磁珠与基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）技术分析RA、原发性干燥综合征(pSS)患者血清蛋白质组，筛选血清标志物并建立了早期RA及pSS诊断模型。为RA、pSS早期诊断及发病机制的研究奠定了基础。同时，在本课题支持的其他RA相关研究中，我们报道了低氧诱导因子（HIF1-α）可促进RA 患者滑膜细胞及T、B细胞的相互作用，进而加重RA病情，为深入揭示 RA 发病机制提供了新的线索和思路。本课题已发表 SCI 论文 3 篇，并有1篇 SCI 论文已经投稿。