子痫前期滋养细胞TARC及MDC分泌与母胎界面TH1/Th2偏移的关系

母胎界面Th1型免疫反应增强，滋养细胞受到免疫损伤以致侵入能力受限，是导致子痫前期滋养细胞功能障碍从而发病的明确原因之一。孕期妇女外周血及母胎界面Th细胞表面趋化因子受体的表达提示趋化途径可能是母胎界面Th1/Th2构成的机制。此外，趋化因子还可诱导胎盘细胞分泌细胞因子，参与Th1/Th2环境的建立，因此对子痫前期患者母胎界面趋化因子及受体的研究有助于探索其Th1/Th2偏移的产生原因。预试验的筛查发现，子痫前期胎盘CCR4及其配体表达下降。CCR4是Th2细胞的主要募集受体，推测其可能通过影响Th2细胞趋化等途径参与发病。本研究首先将对子痫前期母胎界面CCR4及其配体TARC及MDC的表达进行评价；之后通过流式细胞术、趋化试验等探讨CCR4及其配体是否通过趋化及诱导细胞因子产生两大机制参与Th1/Th2平衡建立，明确子痫前期母胎界面Th1/Th2偏移的发生机制。

目的：研究趋化因子TARC/CXCL6在早孕母胎界面的表达与定位，探讨TARC/CXCL6对细胞滋养细胞增殖及迁移侵润的影响及其分子机制。方法：1、 PCR检测TARC/CCR4,CXCL6在早中晚孕三期胎盘，TARC/CCR4在重度子痫前期胎盘及早期蜕膜及原代培养早孕细胞滋养细胞中的表达； 2、免疫组化检测其在早期及足月母胎界面的表达及定位情况； 3、免疫荧光检测早孕绒毛原代滋养细胞中TARC/CCR4的表达，并检测早孕原代细胞滋养细胞的纯度；4、Elisa测定培养原代细胞滋养细胞上清中TARC/CXCL6的分泌量；5、应用MTT检测TARC/ CXCL6对HTR8/SVneo细胞及原代细胞滋养细胞增殖的影响6、transwell迁移试验及Matrigel侵润试验，检测TARC/ CXCL6对滋养细胞迁移能力侵润的影响,并行抗体阻断实验检测实验的特异性；7、不同浓度rhCXCL6处理绒毛外植体，检测CXCL6对绒毛外植体迁移的影响； 8、western-blot检测外加重组蛋白TARC时其下游分子:基质金属蛋白酶MMP13，MMP2，MMP9，金属基质蛋白酶抑制剂TIMP-1,TIMP-2及粘附分子整合素integrin-α5，integrin-β1的表达变化；9、明胶酶谱方法研究TARC/ CXCL6对MMP2，MMP9的表达变化。结果： 1、所有检测组织中均有TARC/CCR4以及CXCL6的表达，并且TARC及CXCL6的表达具有时间特异性，子痫前期胎盘组织TARC的表达量较相同孕周晚期胎盘低。2、TARC 在早孕母胎界面主要定位于CTB，STB尤其是侵润性的细胞滋养层柱的远端及iEVT及腺体顶端,蜕膜基质细胞。CCR4在胎儿面表达相对较弱，但特异性的表达于iEVT，在晚孕胎盘中，TARC特异性强表达于胎盘床巨细胞；CXCL6在早孕期绒毛滋养层细胞均有表达；CXCL6在早孕期蜕膜间质细胞，腺上皮细胞，均有表达；CXCL6受体CXCR1/2在早孕期胎盘滋养层细胞均有表达；在早期蜕膜间质细胞，蜕膜血管内皮细胞，腺上皮细胞均有表达3、免疫荧光发现TARC主要在胞质中表达，CCR4则主要在膜上表达。原代早期滋养细胞的纯度约为95%；4、随培养时间延长，TARC的分泌量有累积重叠效应。5、TARC/ CXCL6对滋养细胞的增殖无明显影响，但TARC可增加滋养细胞迁移侵