t-PAmRNA非翻译区对其表达影响的研究

用反转录PCR从人黑色素癌细胞中扩增出t-PA5’-UTRcDNA序列；同时进行t-PA3’UTR缺失突变。通过体外翻译，研究UTR对t-PA表达的影响。结果表明，t-PAmRNA3’-UTR长约200nt的富含AU的序列以及5’端UTR的一个AUG三联体对t-PA表达均有明显的抑制作用。综合分析了上述序列调节t-PA表达的可能机理，提出了调控的模式。用t-PA3’-UTR缺失、5’-UTR经AMVRNA5’-UTR置换的t-PAcDNA插入真核表达载体构建重组质粒，转染CHO-dhfr-细胞，获得表达水平4000IU/10（6）细胞/24h的高效表达细胞株。该细胞经稳定性试验、遗传特性分析、致瘤性试验等鉴定证明其为性能良好的工程细胞株，该实验验证了本研究提出的调控模式。