肝癌肝移植术后肿瘤转移复发预测分子的筛选及功能分析

肝移植能同时切除肝癌及其发生癌变的土壤，即硬化的肝脏，已成为治疗肝癌的有效手段。但在我国，肝癌肝移植后3年肿瘤转移复发率高达40-60％，肿瘤转移复发成为提高肝癌肝移植疗效的主要障碍，现有的临床病理指标尚无法准确预测肝癌肝移植后肿瘤的转移复发，分子指标有望大幅提高预测的准确性，特别是血清中的分子预测指标，临床实用性强。本课题拟应用同位素亲和标记联合串级质谱技术，筛选血清中与肝癌肝移植后转移复发相关的蛋白；利用大样本进一步分析其在肝癌肝移植患者血清中的表达水平及其与转移复发的关系，建立肝癌肝移植术后转移复发的血清学分子预测模型；应用组织芯片分析预测模型中的关键蛋白在肝癌及癌旁组织中的表达情况，以确定它们的的组织来源；同时对关键蛋白进行体内、外功能分析。通过本课题的研究，将为肝癌肝移植术后肿瘤转移复发的早期预测和防治以及进一步探索潜在的分子干预靶点提供科学依据,具有重大的临床应用价值。

在我国，肝癌肝移植后肿瘤转移复发成为提高肝癌肝移植疗效的主要障碍。本课题应用同位素亲和标记联合串级质谱技术，筛选血清中与肝癌肝移植后转移复发相关的蛋白,发现表达差异显著（上调或下调1.2倍以上）蛋白15个。应用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别在测试集(n=173)和验证集(n=98)中进行大样本分析,发现仅Lumican在复发组血清中表达显著低于非复发组。多因素分析表明血清中的Lumican水平是影响肝癌患者预后的独立因素。生存曲线提示Lumican高表达的患者术后的无瘤生存率明显优于Lumican低表达组。肝癌细胞转染RNA干扰质粒后，肝癌细胞运动和侵袭能力明显增加，同时细胞上皮标志物表达降低，肝癌细胞呈现EMT形态改变，提示Lumican表达改变可能影响肝癌细胞的EMT过程。.在肝癌患者外周血中首次发现两个血浆循环DNA中的SNP位点（rs894151和rs12438080）与肝癌肝移植术后转移复发相关，可用于肝移植术前剔除高转移复发风险的肝癌病例，利于有限供肝资源的合理分配。研究结果发表在“PLoS One” （2011年）。在国际上首次利用活体流式细胞仪在肝癌患者中检测循环肿瘤细胞，发现循环血肿瘤细胞与肝癌病情进展密切相关，有望为干预肝癌术后转移复发提供新的治疗思路和靶点，研究结果已发表在“Cancer Research” （2012年）。.我们在血浆中发现了7个HBV相关肝癌特异的miRNA，在国际上首次建立了肝癌的血浆miRNA诊断模型。该模型可有效区分AFP阴性肝癌患者和对照人群, 较传统的AFP筛查有明显优势，有望成为肝癌患者的临床早期诊断手段。该结果以第一作者发表在“J Clin Oncol”(2011年)。在肝癌组织中还发现若干与肝癌转移复发相关的新型标志物，包括趋化因子CXCL5、异粘蛋白metadherin、LRP1等。研究结果以通讯或第一作者，分别发表在“Hepatology” (2012年) 、“Clin Cancer Res”（2011年）和“PLoS One”（2011年）。.课题负责人为2012年度国家杰出青年科学基金获得者。以第一或通讯作者发表与本课题相关的论文15篇，均为SCI收录。已申请国内专利5项，获得授权专利3项。以第二完成人获国家科技进步二等奖。