鱼类抗病育种的探索--抗体基因克隆与表达的研究

用培养的鱼类细胞繁殖草鱼出血病病毒，制备纯化病毒作为抗原免疫小鼠.从免疫脾细胞分离mRNA，合成cDNA。用PCR技术构建了草鱼出血病病毒的单链嵌合抗体基因的cDNA文库。用亲和选择和ELISA法筛选和鉴定了30个特异抗体克隆。通过对阳性克隆在大肠杆菌中的大量表达制备单链抗体，用中和抗体检测技术鉴定出7个具有中和能力的克隆。对分离自全国各地的12个草鱼出血病病毒株核酸电泳分析，各毒株的电泳图谱存在明显差异。而中和单株单鱼病病毒的7个中和抗体对其它相关毒株不具备中和能力。建立了pelgbrene介导的鱼类培养细胞基因转移技术和检测草鱼出血病病毒的RT-PCR检测技术。