苎麻叶抗猪繁殖与呼吸综合征病毒活性物质基础与分子机制研究

猪繁殖与呼吸综合是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的一种猪的烈性传染病，是对我国和世界养猪业危害最大，引起经济损失最严重的疾病之一。目前尚缺乏对该病有效的控制措施，临床上尚无可供使用的抗PRRSV病毒药物。本实验室在国内外首次发现苎麻叶具有较好的抗PRRSV病毒的能力。苎麻叶乙醇提取物大孔树脂60%的乙醇洗脱部位可使PRRSV病毒在细胞上的感染滴度降低3万倍左右，RNA拷贝数降低1000多倍，而且该活性部位在苎麻干叶中提取率高达15.8%。本项目拟在前期工作的基础上，系统阐明苎麻叶抗PRRSV病毒的活性物质基础以及分子机制，为开发疗效确实、价格低廉的新型抗蓝耳病病毒药物提供化学和药理学依据。同时建立系统的抗PRRSV病毒药物分子作用机制研究体系，为开发更多的抗PRRSV病毒药物提供技术支撑。

以抗PRRSV活性结果为导向，从苎麻叶60%的乙醇/水提取部位中分离得到13个化合物，并从中筛选得到一个具有优异抗PRRSV活性的化合物Alterporriol C。细胞试验表明Alterporriol C能显著抑制PRRSV的复制，其半数有效浓度（EC50）为7.65μM，半数细胞毒浓度（CC50）为402.5μM，选择性指数（SI）为52.62。同时，Alterporriol C能显著抑制PRRSV 复制关键基因ORF7 RNA的复制和蛋白的表达以及子代病毒的产生。抗病毒机制研究发现，Alterporriol C不能直接杀灭病毒或干扰病毒在细胞表面的吸附，主要是通过抑制病毒的内吞和在细胞内的复制而达到抗PRRSV的作用。总之，我们的研究表明，Alterporriol C是一个很好的抗PRRSV病毒候选药物。另外，从一株中国南海肉芝软珊瑚共附生真菌的次级代谢产物中分离得到一个新的蒽醌类化合物Tetrahydroaltersolanol C，能显著抑制PRRSV的复制，其半数有效浓度（EC50）为12.11μM，半数细胞毒浓度（CC50）为395.31μM，选择性指数（SI）为32.64。. 应用高致病性PRRSV DY株人工感染30日龄断奶仔猪，并投饲不同剂量的苎麻叶60%乙醇/水洗脱部位提取物，观察其抗PRRSV病毒效果。结果表明，高剂量（1g药物/kg体重/d/只）的苎麻叶60%乙醇/水洗脱部位提取物具有良好的抗PRRSV效果，能给感染小猪提供100%的保护率，同时明显改善了感染猪的生理体征（包括降低体温，增强食欲等）和PRRSV在体内的靶脏器（肺脏、肾脏和淋巴结等）的病变情况。本研究为苎麻叶在养殖业中的应用提供了新的途径。. 根据PRRSV DY株序列，设计引物，扩增了11个PRRSV 结构和非结构蛋白基因，成功构建了11个原核表达菌株并在大肠杆菌中实现了可溶性、高活性的融合表达，为进一步研究化合物（Alterporriol C和Tetrahydroaltersolanol C）与PRRSV关键蛋白的分子互作及其抗病毒分子作用机制奠定了基础。