pcDNA3.1（-）-EGR-1-yCDglyTK-eIF4E载体构建及其对食道癌放射增敏作用及相关机理研究

Esophageal is common malignant tumor, surgical resection is an important treatment method, but the postoperative recurrence or transfer middle-late high, toxic reaction chemotherapy; Radiation treatment although extensive application; But pure existence of radiotherapy cancer radiation resistance and large dose of radiation damage to normal tissues serious problem, so need to search for new treatment method; Egr-1 gene belongs to the regulation effects transcription factor family, can feel directly ionizing radiation of the factors such as exciting, in the gamma rays can illuminate strong induction downstream gene expression; Studies show that many malignant tumors and tumors in the organization elF4E excessive expression, and invasion and metastasis of tumor angiogenesis and related ability; This project is to construct the elF4E gene targeting of RNA interference plasmid and tumor radiation sensitive regulation of the promoter fusion yCDglyTK suicide gene combination treatment system, non-toxic side effects of nanometer calcium phosphate as the carrier, the gene therapy of esophageal cells into system, to enhance gene therapy target of radiotherapy sensitization and the purpose of sex. The research content: study the nanometer and gene therapy ZhuanRan ratio and the combination of the system efficiency; Discusses this system in vitro and in vivo or kill esophageal tumor cell function and mechanism. The results will be for clinical esophageal therapy provides for new ideas.

食管癌是常见的恶性肿瘤，手术切除是其重要的治疗手段，但中晚期患者术后转移或复发率高，化疗毒性反应大；放射治疗虽然适用广；但单纯放疗存在肿瘤的辐射抗性和大剂量射线对正常组织严重损伤的难题，因此需要寻求新的治疗方法； Egr-1基因属于调控作用的转录因子家族，可直接感受电离辐射等因素的刺激, 在γ射线照射下能强烈诱导下游基因表达；研究表明，很多恶性肿瘤和肿瘤旁组织中elF4E过度表达，与肿瘤血管生成及侵袭转移能力相关;本项目拟构建以elF4E基因为靶向的RNA干扰质粒与肿瘤放疗敏感性启动子调控的融合自杀基因yCDglyTK相结合的治疗体系,以无毒副作用的磷酸钙纳米为载体，将该基因治疗体系导入食管癌细胞中，达到增强基因治疗靶向性及放疗增敏性的目的。研究内容：研究纳米与基因治疗体系的结合比率及转染效率；探讨该体系体内外杀伤食管癌细胞和放射增敏作用及其机制；研究结果将为临床食管癌基因治疗提供新的思路

研究背景及科学意义.食管癌是常见的恶性肿瘤，手术切除是其重要的治疗手段，但中晚期患者术后转移或复发率高，化疗毒性反应大；放射治疗虽然适用广；但单纯放疗存在肿瘤的辐射抗性和大剂量射线对正常组织严重损伤的难题，因此需要寻求新的治疗方法；基因治疗的关键是载体与靶向性问题，研制新型的非病毒载体是基因治疗的关键；Egr-1基因属于调控作用的转录因子家族，可直接感受电离辐射等因素的刺激, 在γ射线照射下能强烈诱导下游基因表达；利用Egr-1启动子调控治疗基因表达，进行恶性肿瘤的基因-放射靶向治疗研究；研究表明，很多恶性肿瘤和肿瘤旁组织中elF4E过度表达，与肿瘤血管生成及侵袭转移能力相关，因此本项目构建以elF4E基因为靶向的RNA干扰质粒与肿瘤放疗敏感性启动子调控的融合自杀基因yCDglyTK相结合的治疗体系,以无毒副作用的磷酸钙纳米为载体，将该基因治疗体系导入食管癌细胞中，达到增强基因治疗靶向性及放疗增敏性的目的。该项目研究有望为肿瘤的临床治疗提供新的手段和靶点...研究内容：靶向基因治疗体系构建；研究非病毒载体与基因治疗体系的结合比率及转染效率；探讨该体系体内外杀伤食管癌细胞和放射增敏作用及其机制..重要结果及关键数据.1 成功构建pCDNA3.1- Egr-1 -yCDglyTK-EIF4E基因治疗体系.1. eIF4E蛋白在食管癌组织中高表达，癌旁组织和正常组织中低表达。.2. eIF4E蛋白的表达水平随着食管癌浸润深度的加深、侵袭转移的发生和临床分期的进展而增高，eIF4E蛋白的表达水平随着食管癌组织分化程度的降低而升高。.3 eIF4E的过表达可以降低食管癌EC9706细胞对顺铂、氟尿嘧啶、紫杉醇的敏感性，用RNAi技术抑制eIF4E的表达，可以增加EC9706细胞对顺铂、氟尿嘧啶、紫杉醇的敏感性。.4 eIF4E-shRNA组相对阴性对照组细胞侵袭能力明显降低，eIF4E过表达组相对阴性对照组细胞侵袭能力要强。.5 CPNP-pCDNA3.1- Egr-1 -yCDglyTK-EIF4E/5-FC治疗体系在体内外实验中对食管癌EC9706细胞具有显著的杀伤作用