引经药醋柴胡影响细胞信号转导及代谢增强抗癌药肝靶向作用机制分析

肝经引经药醋柴胡能显著增强大黄酸、白藜芦醇、氧化苦参碱、龙胆苦苷在肝内的摄入，减少排出达到药物在肝脏的富集效果，药效实验证实可增加疗效降低其毒副作用，在刚结题的国家自然基金项目研究中已得以证实，中药引经药可能成为靶向给药的新途径，其靶向作用提示醋柴胡可能通过影响细胞信号转导及代谢达到肝靶向增强。基于此发现，我们利用细胞和动物模型，采用细胞转染、基因静默、实时荧光定量RT-PCR、Western blot等先进的分子生物学技术，探讨醋柴胡对细胞信号转导的主要执行者-转运蛋白活性、基因转录及蛋白表达以及药物代谢酶活性等的影响，阐释醋柴胡引经作用机制，确定其作用靶点及途径，为肝癌治疗寻找新的靶向给药设计途径，为药性理论研究提供新的方法，势必将有力推动中医药创新理论的发展，推动中医药现代化进程。

针对前期研究提示的醋柴胡通过影响细胞信号通路影响药物的体内分布，本研究主要进行了一下内容。首先针对醋柴胡临床主要用于肝郁不疏疾病，我们构建了“怒伤肝”引起的肝郁模型，通过检测血液中肝功能指标，确证模型成功；其次我们利用免疫组化技术考察了肝功受损情况下MRP2、BSEP、Ntcp表达显著降低（P<0.001），给药组上述蛋白表达则被显著上调，不同的给药部位对这几种指标的调节作用不同；我们还利用RT-PCR探讨了模型及醋柴胡对肝内多种转运蛋白基因的表达，结果表明，与正常组比较，肝郁模型不影响Mrp2，Bsep，Ntcp，Ost-α，Oatp2，Asbt的mRNA表达（P>0.05）；与模型组比较，醋柴胡不影响Mrp2，Bsep，Ntcp，Ost-α的基因表达（P>0.05）；但显著增加Oatp2和Asbt基因表达 (P<0.01）。.细胞模型方面我们构建了Pgp、Mrp2、及OCT2的过表达细胞模型，建立了其基因表达、蛋白表达以及活性检测的方法，然后进行了醋柴胡对这些转运蛋白活性、蛋白表达、基因表达的影响。其中Pgp的活性分别以底物罗丹明B和秋水仙碱进行检测，蛋白表达采用Western blot技术、基因表达采用RT-PCR方法进行。结果显示：醋柴胡显著抑制Pgp过表达细胞株Pgp的基因表达、蛋白表达，增加对罗丹明B的摄取量，但对于正常细胞的Pgp基因表达、蛋白表达以及活性均显示微弱的影响；醋柴胡可显著增加OCT2过表达细胞株OCT2底物的摄取活性，增加其基因及蛋白表达；醋柴胡抑制Mrp2过表达细胞株对Mrp2 底物的外排活性、促进其基因及蛋白表达活性。.除此之外我们还进行了醋柴胡对正常细胞中（HEK293和BRL3A细胞株）转运蛋白和基因表达及活性的影响。结果显示：醋柴胡可上调NTCP的基因及蛋白表达，但对其底物牛黄胆酸钠的摄取则影响不显著；醋柴胡显著降低MRP1、BESP的基因表达，升高MRP2的基因表达，对OATP2的基因表达影响不显著；醋柴胡对MRP1蛋白表达影响不显著，但增加其对秋水仙碱的摄入（通过抑制剂证实）；对醋柴胡不同部位的研究显示，醋柴胡相同部位对不同转运蛋白作用不同，而不同部位对相同转运蛋白的影响也有差异。.药物转运除受转运蛋白的影响外，还受代谢酶的影响。本研究探讨了醋柴胡对谷胱甘肽硫转移酶、葡萄糖醛酸酶、CYP1A2,CYP3A4，CYP2C