三拗汤宣肺功效对变应性气道炎症Th17/Treg免疫调节的机理研究

经典名方三拗汤是宣肺解表平喘止咳的代表方之一，具有抑制变应性气道炎症、降低气道高反应性的作用。本课题在前期研究的基础上提出：三拗汤宣肺功效与TH17/Treg细胞亚群免疫调节具有相关性，通过"宣肺"将相关细胞和功能控制在合适状态。工作路径为：以三拗汤及药对配伍干预卵清蛋白致敏的Balb/c小鼠变应性气道炎症模型, 综合评价病理改变和气道反应性、淋巴细胞TH17/foxp3+CD4+CD25+ Treg分化、相关转录因子与炎症因子基因和蛋白表达水平三方面指标，结合体外观察三拗汤及其配伍效应部分在细胞因子环境刺激的条件下,对小鼠正常脾细胞Th17、Treg细胞诱导分化、扩增的影响，探讨经由T淋巴细胞免疫平衡调节而获得抑制气道炎症、降低气道反应性的宣肺效应机理与科学内涵，为临床用药提供客观依据。

目的：三拗汤（SAD）是宣肺止咳平喘经典方,探讨其宣肺抑制变应性气道炎症、降低气道高反应性的作用与Th17/Treg 免疫调节的重要关系。.方法：正交试验评价SAD配伍配比。以SAD不同剂量干预OVA致敏激发Balb/c 哮喘小鼠变应性气道炎症模型,综合评价其改善气道炎症、降低气道反应性作用。流式细胞仪检测小鼠脾Th17/CD4+CD25+Foxp3+Treg 水平,PCR/Western blot、ELISA检测肺组织、BALF中Foxp3、RORγT及炎症因子基因和蛋白表达水平。体外TGF-β/IL-6/IL-23/anti-IFN/anti-IL-4刺激培养小鼠脾细胞,流式细胞仪检测SAD效应部位对Th17/CD4+CD25+Foxp3+Treg 水平的影响。UPLC-TOFMS检测SAD合煎与单煎合并液差异性成分,比格犬体内药动学变化。.结果：1.SAD对小鼠ADD（short-term）、LIT (long-term)模型均具有降低气道炎症、降低气道阻力的作用。SAD最优配伍配比为麻黄6g,杏仁9g,甘草3g；显著降低BALF 白细胞总数、EOS,抑制Ach引起的气道阻力,减轻肺和气管病理（与模型组比P<0.01-0.05）。ADD模型中SAD升高BALF IL-10、降低IL-4（与模型组比P<0.01-0.05）。LIT模型中SAD效应部位显著降低BALF IL-17（与模型组比较P<0.01-0.05）,乙酸乙酯部位优于其他。.2.ADD模型组SAD明显升高小鼠脾CD4+CD25+Foxp3+Treg、肺组织Foxp3+mRNA和蛋白表达（与模型组比较P<0.01-0.05）。LIT模型中SAD各效应部位Treg、Foxp3mRNA和蛋白表达增加（P<0.05），Th17、肺组织RORγT、IL-17mRNA和蛋白表达量降低, BALF IL-17显著下降,（与模型组比较P<0.01-0.05）。体外细胞因子联合刺激培养小鼠脾细胞,乙酸乙酯部位显著升高其Treg（P<0.01-0.05）。.3.UPLC-TOFMS从合煎与单煎液中鉴定出11个差异性成分,合煎有效成分含量上升。配伍前后比格犬药动学存在显著差异,有效成分生物利用度显著性提高。 .结论:SAD经由Th17/Treg调节是抑制气道炎症、降低气道反应性宣肺效应的重要机制。