可突破胚胎期免疫耐受的双调控型HBV转基因小鼠模型的建立和评价

HBV感染仍然是全球性公共卫生问题之一，其致病机制尚未完全清楚。由于缺乏理想的小动物模型，有关HBV感染与致病机制的研究受到很大影响。HBV小鼠模型，特别是转基因小鼠模型研究一直是HBV研究的热点和难点。现有HBV转基因小鼠模型的最大缺点是小鼠对HBV处于免疫耐受状态，其肝脏不能产生类似人乙型肝炎的免疫病理变化。如何建立可突破胚胎期免疫耐受的HBV转基因小鼠模型成为当前该领域研究的关键问题之一。本研究拟联合Tet四环素调控系统和Cre/loxP基因敲除系统，建立可突破胚胎期免疫耐受的双调控型HBV转基因小鼠模型。该小鼠只有在dox诱导时，HBV基因才能在Tet和Cre系统的双重调控下在肝细胞中特异性表达，并诱发宿主产生针对病毒抗原的免疫应答和相应的免疫病理变化。这种新型HBV转基因小鼠模型的建立有望为HBV的致病机制，以及HBV感染后宿主免疫反应等关键问题的研究提供新的研究平台和思路。

HBV感染仍然是全球性公共卫生问题之一，其致病机制尚未完全清楚。由于缺乏理想的小动物模型，有关HBV感染与致病机制的研究受到很大影响。HBV小鼠模型，特别是转基因小鼠模型研究一直是HBV研究的热点和难点。现有HBV转基因小鼠模型的最大缺点是小鼠对HBV处于免疫耐受状态，其肝脏不能产生类似人乙型肝炎的免疫病理变化。因此，本研究拟联合Tet四环素调控系统和Cre/loxP基因敲除系统，建立可突破胚胎期免疫耐受的双调控型HBV转基因小鼠模型。本课题首先需要制备带GFP报告基因的HBVTg转基因小鼠，再将该小鼠与rTALAP-1/LC-1双转基因小鼠杂交制备rTALAP-1/LC-1/HBVTg三转基因小鼠，然后检测其肝脏HBV基因的表达状况。研究结果发现rTALAP-1/LC-1/HBVTg三转基因小鼠经Dox诱导后，利用小鼠活体成像技术，仅在其肝脏检测到Luc报告基因的表达，提示Cre重组酶在小鼠肝脏特异性表达的靶向性良好，但在其肝脏未能成功诱导GFP报告基因与HBV基因的表达。分析原因可能与IRES间隔序列的影响，以及GFP报告基因本身的特异性较差有关。因此，课题组决定采用替代方案继续完成既定研究任务。首先，在新的HBVTg转基因小鼠构建中将HBV基因下游原有的GFP报告基因替换为Luc报告基因，并去除二者之间原有的IRES间隔序列，使HBV基因与Luc报告基因直接融合表达；其次，重新构建以LacZ为报告基因，而且受四环素调控系统控制的可表达Cre重组酶的转基因小鼠PBI3C。截至目前，在替代方案中重新制备的rTALAP-1/PBI3C/HBVTg三转基因小鼠经Dox诱导后仍未能成功诱导HBV基因的表达。分析原因可能与我们获得的HBVTg F0代小鼠数量偏少有关，未能筛选到符合实验要求的转基因小鼠；当然，也有可能是因为构建三转基因小鼠的程序步骤太过复杂，使得靶基因的调控效率大幅降低所致。下一步，课题组拟制备更多的HBVTg F0代小鼠，然后按照前述实验方法进一步确定联合应用四环素调控系统和Cre/LoxP调控系统制备双调控型HBV转基因小鼠模型的可行性，务必最终得出一个明确的结论，此项工作目前仍在进行中。截至目前，课题组发表中文核心期刊论文1篇，申请国家发明专利1项。