山羊高频针刺镇痛耐受机理的研究

针刺镇痛机理是重要的外科技术，是神经科学领域的重要研究方向之一。研究表明针刺镇痛效果存在频率和动物种属的差异。反刍动物（牛、羊）针刺镇痛效果优于人和其它种属动物，且高频镇痛效果较低频好。然而，持续高频针刺可诱导镇痛耐受。此现象已成为兽医针刺镇痛研究的核心问题。本项目使用高频电针连续刺激山羊"百会、鬐甲"组穴2 h，采用钾离子透入法测定痛阈，分别于针刺前和针刺后0、0.5、1、2、4、6、8和12 h采取镇痛相关的脑核团和脊髓组织样品，放免法测定阿片肽（脑啡肽、β-内啡肽和强啡肽）和抗阿片肽（八肽胆囊收缩素和痛敏素）含量，荧光定量PCR测定阿片肽、抗阿片肽及其相应受体mRNA水平，分析痛阈与中枢阿片肽或抗阿片肽含量、阿片肽或抗阿片肽及其相应受体mRNA表达水平的相关性，阐明反刍动物针刺耐受机理，全面揭示针刺镇痛的调节机制，促进神经科学的发展和针刺镇痛技术在兽医临床上的应用。

针刺镇痛是神经科学领域的重要研究方向之一。研究表明针刺镇痛效果存在频率和动物种属的差异。反刍动物针刺镇痛效果优于人和其它种属动物。然而，持续高频针刺可诱导镇痛耐受。这种耐受严重影响针刺在兽医临床上应用。本项目选用“百会–三台”和“耳根–三阳络”组穴，60 Hz、3 v持续电针6 h，建立了反刍动物急性针刺镇痛耐受模型。参照山羊脑立体定位图谱以及核团和神经元形态特征，确定获取目标核团组织样品方法。采用钾离子透入法测定痛阈，荧光定量PCR测定中枢内源性阿片肽（脑啡肽原）和μ-受体以及抗阿片肽（孤啡肽原、八肽胆囊收缩素原）和抗阿片肽受体（ORL1、CCKB受体）mRNA水平，ELISA试剂盒测定中枢脑啡肽水平。结果显示持续针刺影响内源性阿片肽水平，促使八肽胆囊收缩素（CCK-8）和孤啡肽（OFQ）在不同镇痛相关核团和区域的释放，降低脑啡肽原mRNA的表达，增加前体CCK 和孤啡肽原mRNA的表达，改变了阿片肽受体（μ-受体）和抗阿片肽受体（ORL1、CCKB受体）mRNA水平。中枢脑啡肽、脑啡肽原mRNA及μ-受体mRNA水平与痛阈变化呈正相关；CCK-8、CCK mRNA、CCKB型受体mRNA、OFQ和ORL1受体mRNA水平与痛阈值呈显著的负相关性。.　　本项目研究确定了针刺耐受山羊中枢阿片肽和抗阿片肽的释放规律，以及中枢阿片肽与抗阿片肽及其受体基因表达时程规律，初步阐明了山羊高频针刺镇痛耐受的机制，为针刺镇痛的临床应用奠定了重要基础。