结直肠癌新的hTERT基因启动子结合蛋白的垂钓及功能研究

端粒酶逆转录酶（hTERT）是端粒酶催化亚单位，在端粒酶活性发挥中起关键作用。hTERT启动子能选择性地驱动hTERT基因在肿瘤中高表达。而人们对结直肠癌中hTERT调控的分子机制，了解尚不够全面深入。前期研究中运用我们设计的新型启动子垂钓鉴定系统成功垂钓出COX-2启动子结合蛋白p300及hTERT启动子结合蛋白AP-2β，而AP-2β能与hTERT启动子特异性结合，促进其表达。在此基础上，我们将：1）在结直肠癌中运用该垂钓鉴定系统进一步垂钓、鉴定新的hTERT启动子结合蛋白；2）通过报告基因研究这些新的hTERT启动子结合蛋白对hTERT启动子活性的影响，3）通过提高或敲低hTERT启动子结合蛋白的表达后探讨它们对结直肠癌细胞生物学功能的影响。通过本课题，以期进一步阐明结直肠癌中hTERT调控的分子机制，发现部分新的hTERT结合蛋白，并为以端粒酶为基础的分子靶向药物研究提供新的靶点。

人端粒酶逆转录酶（human telomerase reverse transcriptase，hTERT）是端粒酶的催化亚单位，是端粒酶的限速酶，在端粒酶活性发挥中起关键作用。hTERT表达升高被认为是肿瘤发生和进展的标志性指标。肿瘤基因hTERT启动子能选择性地促进hTERT基因在肿瘤细胞而非正常细胞中表达。但是人们对于肿瘤细胞是如何激活hTERT的转录表达及提高hTERT的活性知之甚少。通过本项目研究，我们垂钓到一批结直肠癌新的hTERT基因启动子候选结合蛋白，并已鉴定了SUPT5H是结直肠癌中端粒酶启动子区域的特异结合蛋白。在肿瘤细胞中SUPT5H的表达明显地激活了hTERT启动子驱动的GFP的表达。抑制SUPT5H的表达可以降低hTERT启动子驱动的GFP的表达和端粒酶的活性，缩短端粒长度及促进细胞衰老。我们的研究结果证实：SUPT5H是结直肠癌中端粒酶启动子区域的特异结合蛋白，SUPT5H有可能作为一个新的肿瘤标志物，并用于肿瘤治疗的新型靶点。