抗体介导靶向递送小干扰RNA沉默Foxp3基因效应及抗肿瘤实验研究

CD4+CD25+调节性T细胞（Treg）是具有独特免疫调节功能的T细胞亚群，其数量或功能在恶性肿瘤患者外周血、引流淋巴结或肿瘤局部组织中显著增加，与患者预后呈负相关，清除或封闭Treg抑制功能能够增强抗肿瘤免疫反应。因此，Treg成为肿瘤免疫治疗新靶点。Foxp3是Treg发育和功能的关键调控基因，其持续高表达是维持Treg分化和功能所必需。本课题拟在前期构建CD3特异性单链抗体-人鱼精蛋白融合蛋白的基础上，利用鱼精蛋白的核酸结合活性以及单链抗体的T细胞靶向功能，递送Foxp3特异性siRNA沉默Treg细胞中Foxp3表达，进而逆转Treg的抑制功能，化敌为友，使其转变为抗肿瘤效应细胞。利用小鼠肿瘤模型，评价这一策略的抗肿瘤效应及机制，以期为肿瘤治疗提供新途径。

在项目执行过程中，我们顺利完成计划书中的主要研究内容，包括了用来介导RNAi序列导入细胞的重组鱼精蛋白的制备，以及针对Foxp3基因的小干扰RNA序列的设计，合成以及干扰效率鉴定，完成蛋白介导工具介导siRNA导入细胞和动物体内后，在特定细胞中，对靶基因Foxp3的干扰效率以及干扰后特定细胞的生物学功能的改变的研究，在动物体内，构建的工具对肿瘤生长的影响效果及其可能的机制。整个研究过程中，我们构建出了有效地基因操作介导工具蛋白和基因干扰工具，并且获得了较好的reg介导效率和干扰效率。在细胞水平，通过该工具，改变目的细胞Treg中Foxp3基因的表达以及Treg细胞的表型，并且在动物体内模型中，抑制了肿瘤的生长。在完成课题的基础上，我们在本课题资助下，发表多篇SCI文章。