基于A2AR信号通路调控的Th17极化在感染后肠易激综合征中的作用

Objective: Th17 polarization participates in the infection, inflammation and Immune related diseases and is involved in the pathogenesis of post infectious irritable bowel syndrome(PI-IBS). Adenosine receptor 2A (A2AR) could regulate the inflammation and immune response. Thus the objective is to investigate the role of Th17 polarization regulated by A2AR signaling pathway in the pathogenesis of PI-IBS..Methods: A mouse model for PI-IBS is established by infection of trichinella spiralis. The intestinal levels of ATP, A2AR, IL-17 and CD4+Th17cell are detected. CD4+T cells and γδ T cells are isolated and cultured. The agonists and antagonists of A2AR、PKA/CREB/NF-κB and JAK/STAT3/RORγt are used to verdict whether γδ T cells could induce CD4+T cells’ Th17 polarization. Furthermore, A2AR and/or γδ TCR gene knockout mouse are used to prove in vivo the impact of the regulation on the PI-IBS mouse’s intestinal inflammation, motility, viceroy hypersensitivity and mucosal barrier. .Significance: The immune mechanism will be elucidated based on the Th17 polarization regulated by A2AR signaling pathway, providing theoretic and experimental clues for the treatment of PI-IBS.

目的：Th17极化参与感染、炎症和免疫性疾病，与感染后肠易激综合征（PI-IBS)发病有关。腺苷2A受体（A2AR）可调节炎症和免疫应答。本项目探讨基于A2AR信号通路调控的Th17极化对PI-IBS发病的影响及机制。.方法：旋毛虫感染建立PI-IBS小鼠模型，检测肠组织ATP, A2AR，IL-17和CD4+Th17细胞表达。分离纯化CD4+T细胞及γδT细胞，用A2AR、PKA/CREB/NF-κB及JAK/STAT3/RORγt的激动剂或拮抗剂证实γδ T细胞辅助CD4+T细胞产生Th17极化，利用A2AR/γδ TCR基因敲除小鼠在体内研究该调控作用对PI-IBS小鼠肠道炎症、肠道动力、内脏高敏感性及肠粘膜屏障功能的影响。.意义：从A2AR调控Th17极化的新角度认识PI-IBS免疫学机制，为寻找PI-IBS新的干预靶点提供理论和实验依据。

1.项目背景：.肠易激综合征（irritable bowel syndrome, IBS）临床上主要表现为腹痛或腹部不适伴排便习惯改变和（或）大便性状异常，其病程迁延反复，常常严重影响生活质量和心理健康，加重医疗费用负担。IBS由胃肠动力异常、内脏高敏感、感染、免疫紊乱、生活方式、社会心理因素等多种复杂因素共同致病，近年来，肠道低度炎症和免疫激活已经成为IBS治疗的重要靶点。PI-IBS小鼠肠道白细胞介素17 (interleukin 17, IL-17) 水平明显增加，肠道TCRγδ T 细胞明显增殖、活化并产生大量IL-17，提示Th17 应答可能在PI-IBS 的发病中起重要作用。腺苷是一种重要的内源性抗炎和免疫调节分子，在PI- IBS 肠道组织中检测到了高浓度腺苷及高表达的腺苷受体A2A 亚型（A2AR）。..2.主要研究内容：.2.1.建立PI-IBS小鼠模型，分析PI-IBS 小鼠肠道组织中ATP, A2AR，IL-17 含量和CD4+Th17 细胞侵润情况。.2.2. 分离纯化PI-IBS 小鼠CD4+T 细胞和γδ T 细胞，利用A2AR 信号通路激动剂或拮抗剂在体外研究A2AR 信号通路对Th17极化的调控。.2.3. 利用慢病毒shRNA靶向敲低A2AR，在体内研究该靶向调控作用对PI-IBS 小鼠肠道炎症、肠道动力、内脏高敏感性以及肠粘膜屏障功能的影响。..3.重要结果和关键数据：.3.1.成功建立PI-IBS小鼠模型，模型小鼠的肠道炎症不明显，但功能指标AWR和CTT明显异常。 .3.2.PI-IBS 小鼠肠道组织中ATP, A2AR，炎症细胞因子尤其IL-17 含量明显升高，CD4+Th17 细胞明显增加，肠道紧密连接蛋白明显减少。.3.3.成功分离纯化PI-IBS 小鼠CD4+T 细胞和γδ T 细胞并进行体外功能鉴定，发现PIIBS小鼠两种细胞数量增加，其表达A2AR和产生细胞因子尤其是IL17的能力增强。.3.4.A2AR激动剂或抑制剂干预实验（体内和体外），激动剂可加重PI-IBS症状，抑制剂则可改善。.3.5.慢病毒干扰shRNA靶向敲低A2AR后，PI-IBS症状改善，而回输CD4+T 细胞或γδ T 细胞可拮抗这种改善作用。.3.6.A2AR在PI-IBS中发挥作用是通过CD4+T 细胞的JAK-STAT3信号途径及γδ