白色念珠菌感染通过调节PSCA表达促进口腔黏膜癌变的功能及机制研究

The infection of Candida albicans plays a promoting role in carcinogenesis of oral mucosa, but the exact function and mechanism remains unclear. Our previous work demonstrated that: Candida albicans up-regulated PSCA expression and activated AKT/mTOR signaling in normal oral epithelial cell line NOK. Furthermore, PSCA demonstrated significantly high expression and inhibiting function in IFNαproduction in oral squamous cell carcinoma（OSCC）。Based on the previous findings, we put forward the scientific hypothesis that Candida albicans stimulates PSCA expression through PI3K/AKT/mTOR-YY1 pathway, then inhibits IFNα downstream signaling and finally exerts the pro-cancer effects. To verify this hypothesis, we will conduct in-depth studies in PI3K/AKT/mTOR-YY1 activation and PSCA expression induced by Candida albicans, then explore whether and how PSCA promotes OSCC development and metastasis. Finally analyze the association between Candida albicans infection, PSCA expression and clinical prognosis of OSCC patients. This project will clarify a new mechanism in OSCC development and progression, and provide new ideas for OSCC diagnosis, treatment and prognosis.

白色念珠菌感染对口腔黏膜癌变具有原发性促进作用，但是其具体、准确的功能与机制仍不清楚。我们的前期工作证实：白色念珠菌感染口腔上皮细胞NOK可上调PSCA表达并可激活AKT/mTOR信号通路；口腔鳞状细胞癌 (Oral squamous cell carcinoma, OSCC)内PSCA显著高表达，并且PSCA可抑制OSCC细胞表达IFNα。为此，我们提出科学假说：白色念珠菌感染通过激活AKT/mTOR通路从而上调PSCA表达，继而通过抑制IFNα下游通路发挥促癌作用。为验证该假说，我们将深入分析白色念珠菌感染后PI3K/AKT/mTOR-YY1信号轴激活及PSCA表达情况，然后体外、体内研究PSCA异常表达对OSCC生成与转移的影响及机制，最后将阐述白色念珠菌感染与PSCA表达以及OSCC患者预后的临床相关性。项目将阐明OSCC发生发展新机制，为OSCC的诊断、治疗与预后判断提供新思路。

本项目原计划阐明PSCA在念珠菌感染中异常表达的分子机制，及其对OSCC发生发展及预后的影响，以期为OSCC的诊治及预后判断提供新策略。我们首先在细胞及组织中检测PSCA表达，qRT-PCR 及免疫组化均证实其在OSCC中表达上调，但western blot结果显示PSCA在OSCC及正常细胞中表达水平无显著差异。这一结果阻碍了我们对PSCA功能及念珠菌感染对PSCA调控作用的研究。我们的前期研究发现，PSCA上rs2294008位点多态性与OSCC易感性相关，且该位点多态性可能影响PSCA定位。因此我们将研究目标调整为：阐明rs2294008位点多态性对于PSCA表达定位及OSCC患者预后的影响。.为了实现研究目标，我们进行ELISA、免疫组化实验，以观察rs2294008位点多态性对PSCA表达、定位、分泌的影响；进一步纳入OSCC患者并随访，分析rs2294008位点多态性与患者预后的相关性。ELISA结果显示：OSCC患者血清可检测到PSCA，而正常人血清均未检测到PSCA分泌；IHC结果显示： rs2294008位点为风险基因型CC的患者，癌巢及上皮细胞中PSCA主要分布于胞浆，CT/TT基因型患者上皮细胞中PSCA分布于胞膜。提示rs2294008位点多态性影响PSCA的定位及分泌。OSCC患者随访结果提示：CT/TT基因型中不饮酒/不吸烟的患者比例较CC基因型高，且与OSCC高的T分级、淋巴结转移及高的临床分期相关。该位点多态性与患者术后复发无显著相关性。.此外，本项目还对OSCC间质内免疫细胞浸润水平与患者临床预后相关性进行研究分析。纳入78例OSCC患者，平均随访时间48个月。发现CD8低表达与淋巴结转移具有相关性，CD57低表达与淋巴结转移及较晚的临床分期具有相关性。单因素分析结果提示：无淋巴结转移、较早的临床分期、CD8或CD57高表达均与较长的生存时间相关。多因素分析结果提示：淋巴结转移情况、CD8及CD57表达水平均是患者术后生存的独立影响因素。ROC曲线提示，CD8及CD57表达水平均是优于TNM分期的预后判断指标。.本项目研究成果为揭示OSCC发生机制及优化预后评估指标提供了新思路。