CD28缺失导致CTL衰老与淋巴瘤抵抗PD-1单抗的相关性及机制研究

Treatment targeting immune checkpoint PD-1 has been demonstrated to be safe and efficacious in lymphoma, but the mechanism of resistance to PD-1 blockade is still unclear. We have reported previously that PD-1 was highly expressed in lymphoma, and the immune response could be partially recovered by PD-1 blockade. Meanwhile, we found a subgroup of cells in PD-1 positive cell population characterized by CD28-CD57+. Some studies have proven that CD28-CD57+ represented senescence of T cells. Based on the expression of CD28 and CD57 in PD-1+ T cell population, we plan to identify the T-cell subsets to distinguish PD-1 resistant T-cells. In this program, we intend to sort different T-cell subsets in PD-1 positive cells and confirm the distinction between CD28-CD57+ and CD28+CD57+ cells in immune exhaustion, aging phenotype, the expression of senescence associated gene, anti-tumor immune function and the effectiveness to PD-1 monoclonal antibody, furthermore, we am gonging to investigate the mechanism of PD-1 resistance and find out how to reverse the PD-1 resistance caused by T-cell senescence. Our research provides a feasible method to overcome PD-1 resistance.

近年来PD-1单抗已经应用于淋巴瘤的临床治疗，然而PD-1单抗抵抗的机制不完全清楚。我们曾报道了阻断PD-1可以部分恢复T细胞的免疫功能，同时在此研究中我们发现PD-1单抗作用的靶细胞中存在CD28-CD57+细胞亚群，这一亚群细胞以免疫衰老为特征。进一步分析提示CD28-CD57+亚群与淋巴瘤预后呈负相关，且与血清IL-8和IL-27水平呈正相关，提示CD28-CD57+亚群是参与淋巴瘤免疫反应的重要细胞。综上我们假设CD28-CD57+亚群参与PD-1单抗抵抗。在本项目中，基于CD28和CD57的表达分选淋巴瘤患者PD-1阳性T细胞的不同亚群，对比分析免疫耗竭和衰老的表型特点、基因表达特点、抗肿瘤免疫功能和对PD-1单抗的反应；应用体外实验和小鼠模型探索CD28-CD57+亚群参与PD-1单抗抵抗的机制，从而为PD-1单抗抵抗提供了机制性研究，并为PD-1单抗抵抗提供了临床解决方案。

近年来PD-1单抗已经应用于淋巴瘤的临床治疗，然而PD-1单抗抵抗的机制不完全清楚。本项目拟探索CD28-CD57+的衰老表型的T细胞对PD-1单抗抵抗的意义及作用，而在临床实践中我们发现单独应用PD-1抑制剂治疗弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）患者的病例较少，且治疗效果并不理想，难以分出治疗效果好与差的分组。及时调整思路，探讨免疫衰老细胞亚群与DLBCL患者治疗反应的相关性，但由于患者间异质性较大，干扰因素较多，实验结果并不理想。在整理本中心DLBCL患者临床资料过程中，将部分临床指标整合到 IPI评分系统中，并构建可视化的列线图模型，以更好地评估DLBDL患者预后。.鉴于实验样本的收集并不顺利，考虑到多发性骨髓瘤患者的骨髓标本易于获得，后续转而研究多发性骨髓瘤（MM）的肿瘤微环境及耐药机制。MM是第二常见的血液系统恶性肿瘤，具有复杂且异质的遗传学景观。新疗法的引入极大地改善了MM的疗效和预后，但由于骨髓瘤细胞具有克隆异质性以及与骨髓微环境存在复杂的相互作用，它仍然是一种高度耐药的疾病，约20%-30%的高危患者无法获得满意疗效。因此，深入剖析MM的发生发展机制，筛选潜在的生物标志物和治疗靶点是十分必要的。本课题组从m6A甲基化修饰角度探讨MM的发生发展机制，发现甲基读取蛋白HNRNPA2B1在MM中显著高表达，干扰HNRNPA2B1的表达能够显著抑制骨髓瘤细胞RPMI-8226细胞的增殖，并促进其凋亡，且是MM的不良预后因素。进一步的机制分析发现HNRNPA2B1介导的TLR4 m6A修饰在MM疾病进程中发挥重要的生物学作用。另外通过蛋白质组学筛选RRMM的潜在靶点。应用TMT-MS/MS方法对初诊和复发/难治性MM间的差异表达蛋白进行筛选，并应用PRM、蛋白免疫印迹和GEO数据集对差异表达蛋白进行验证，筛选出在RRMM中显著高表达的SERPINB9蛋白。除上述研究外，还探讨了IP-10在CAR-T细胞治疗MM患者疗效中的作用分析以及液滴数字PCR在监测病毒载量中的应用，能够指导临床应用。这些骨髓瘤的相关研究结果部分揭示了血液系统恶性肿瘤的免疫微环境，有助于后续进一步深入探讨DLBCL中免疫衰老和免疫调控的相关机制。