猕猴TLR-4的表达分析及其在痢疾杆菌感染中调控宿主免疫应答机制的研究

Rhesus monkey plays an important role in biomedicine research and diarrhea is a very severe intestinal infectious disease. While the diarrhea mechanism of monkey caused by Shigella is not clear. In recent research, Toll like receptor is the first barrier in host when pathogenic bacteria attacks. TLR-4 is the first TLR protein found in mammal, which plays a crucial role in human immune response. In our previous research, the expression of TLR-4 in the intestines, liver and spleen of diarrhea monkey is much higher than that in nomal one, we deduced the higher expression due to the infected by Shigella. In this project, the real-time PCR, animal model, comparative pathology and in vivo hybridization will be employed in the research of Shigella attacking the monkey enteric epithelia.To find the rule of monkey diarrhea and perfect the immune network, the function of TLR-4 will be analysis about Shigella affecting and nosogenesis. This research will be useful in research of monkey diarrhea diagnosis, bacterin and target medicine.

猕猴是生物医药研究中重要的实验动物，痢疾是影响猕猴养殖的一种严重的急性肠道传染病，目前痢疾杆菌致猕猴腹泻的机理还不完全明确。最新研究表明，Toll样受体是病原菌侵袭的首道屏障，直接参与了宿主免疫抵抗过程。TLR-4是最早发现的哺乳动物TLR蛋白，在人体的先天性免疫和适应性免疫中发挥着重要作用，但痢疾杆菌感染猕过程中TLR-4的作用机制还不清楚。前期我们的研究发现，TLR-4在腹泻猕猴的肠道、肝和脾中表达量较大，推测它可能受病原菌的感染上调。本研究拟通过Real-time PCR、免疫缺陷动物模型、比较病理、细胞浸染、原位杂交等实验明确病原菌对猕猴肠道上皮细胞的侵袭与粘附过程，及其与TLR-4的相互作用，进而分析TLR-4在痢疾杆菌侵袭性、致病性中的参与机制，以期揭示痢疾杆菌致猕猴腹泻的部分规律，完善致病相关的调控网络，为猕猴腹泻病的诊断、疫苗研制、药物靶位的研究奠定基础。

从国内圈养猕猴群中分离获得了致腹泻病原菌，建立了病原体快速检测技术（LAMP），并对国内猴群中巴尔通体的感染情况进行了深入分析，确定了五日热巴尔通全是国内圈养猕中广泛存在的一种人兽共患病原。建立了微生物感染动物模型，对感染病原的动物的生理生化特性进行分析，获得了病原体感染后动物生物学特性及相关免疫指标的变化规律。从猕猴外周血单个核细胞中克隆了TLR-4基因的cDNA,对该基因在猕猴心、肝、脾、肺、肾等组织器官中的表达情况进行了分析，用免疫荧光及REAL-TIME PCR等方法分析了病原体感染模型中TLR-4在外源病原体入侵时启动动物机会免疫应答的机制。课题组按任务要求完成了项目研究，培养研究生4名，发表研究论文10篇，其中SCI论文2篇，尚有一篇中文已录用，一篇SCI论文正在审理中。出版学术著作2部。