积雪草基于TGF-β信号通路干预肾小管间质纤维化的机制研究

肾小管间质纤维化是各种慢性肾脏病进行性恶化的共同通路，阻止肾小管上皮细胞转分化为纤维细胞便可保护肾功能，TGF-β信号通路在肾小管上皮细胞转分化过程中扮演重要"角色"。本研究在先期积雪草抗肾小管间质纤维化作用研究基础上，采用单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠模型，应用病理学检测、免疫组化、RT-PCR及Western-blot等方法证明模型大鼠的病理损害及积雪草延缓肾间质纤维化的作用途径和靶点；用TGF-β1刺激大鼠肾小管上皮细胞（NRK52E）发生肌成纤维细胞转分化（TEMT），应用免疫荧光及RT-PCR技术观察积雪草对NRK52E表达E-cadherin、α-SMA等影响，western-blot检测积雪草干预下TEMT的TGF-β信号通路的变化，阐明积雪草抗肾小管间质纤维化的作用机制。为积雪草广泛应用于慢性肾脏病的治疗提供科学依据。

项目背景：肾小管间质纤维化是各种肾脏疾病进展到终末期肾衰竭的共同途径和主要病理基础。因此，现急需开发新药物来阻止肾脏疾病进入ESRD，甚至逆转这种趋势。临床实践证明积雪草能够有效地延缓肾小管间质纤维化的发生发展，但其作用机制和途径并不清楚.. 主要研究内容：本课题组在前期研究积雪草防治肾纤维化的基础上，利用光镜、免疫组化、RT-PCR、western-blot等技术进行研究，并在在体研究的基础上进行离体细胞培养，以探索积雪草防治肾小管间质纤维化的途径和靶点。. 重要结果及关键数据：. 1.本课题在体实验选取了单侧输尿管梗阻大鼠模型（UUO）作为肾小管间质纤维化的动物模型，根据HE染色结果显示UUO模型制作成功，Masson染色显示积雪草组及蒙诺组均有抗肾小管间质纤维化的作用，其中积雪草大剂量组和蒙诺组作用效果相当。为进一步探讨及机制，利用免疫组化、RT-PCR、western-blot等技术进行了进一步的研究。①积雪草能够调节MMP-9/TIMP-1、MMP-2/TIMP- 2的表达，表明积雪草通过调控MMPs/TIMPs动态平衡，使ECM降解增加，减轻肾小管间质纤维化的进展。②积雪草能够抑制Smad2/3、ILK表达，促进Smad7表达，进而我们认为积雪草通过调控Smad信号通路、ILK信号通路防治肾小管间质纤维化，③积雪草组能够促进E-cadherinm表达，抑制snail-1的表达，表明积雪草能够抑制肾小管上皮间质转分化，从而延缓肾小管间质纤维化。. 2.采用TGF-β1诱导肾小管上皮细胞发生上皮间质转分化的实验模型，利用RT-PCR、western-blot等技术进行了进一步的研究。①积雪草能够调节MMP-2/TIMP- 2的表达，表明积雪草减轻肾小管间质纤维化的进展。②积雪草抑制FN、FSP-1的表达，促进E-cadherinm表达，表明积雪草能Smad信号转导系统够抑制肾小管上皮间质转分化，从而延缓肾小管间质纤维化。. 3.上述实验阐明了积雪草通过调控基质金属蛋白酶系统、Smad信号转导系统，抑制肾小管上皮间质转分化等途径防治肾小管间质纤维化。.科学意义：本课题从整体、细胞、分子水平上探讨了积雪草防治肾小管间质纤维化的作用途径及靶点，为积雪草防治肾小管间质纤维化提供了理论依据。