DDX3Y基因变异与精子发生相关性及机制研究

无精子症因子(AZF)缺失是精子发生障碍最主要的遗传因素，然而大多数精子发生障碍患者并未发现此缺失。前期研究表明DDX3Y是AZF区最重要的精子发生基因，含其在内的多基因联合缺失导致生精细胞缺乏，表现为唯支持细胞综合征(SCOS)，该基因的非缺失变异与精子发生的关系目前还不清楚。本项目对DDX3Y编码区、剪接位点及其上游至小卫星MSY2区进行测序分析，分析其变异与精子发生之间的关系；用亚硫酸氢盐修饰后测序分析未突变基因的近端和远端CpG岛的甲基化水平对该基因转录的影响；用RACE实验分析基因变异对转录产物大小的影响；用定点突变、体外表达及功能检测研究有临床意义的突变对基因表达的影响；用RNA干扰试验，观察DDX3Y基因沉默对体外人精原细胞增殖凋亡的影响；观察对小鼠睾丸精子发生的影响。本研究有助于寻找特发性精子发生障碍真正的致病机制。

无精子症因子(AZF)缺失是精子发生障碍最主要的遗传因素，然而大多数精子发生障碍患者并未发现此缺失。前期研究表明DDX3Y可能是AZF区最重要的精子发生基因，含其在内的多基因联合缺失导致生精细胞缺乏，表现为唯支持细胞综合征(SCOS)，该基因的非缺失变异与精子发生的关系目前还不清楚。本项目对DDX3Y编码区、剪接位点及其上游至小卫星MSY2 区进行测序分析，分析其变异与精子发生之间的关系，发现新发突变与精子发生有关；应用SEQUENOM Massarray时间飞行质谱(TOFMS)方法分析未突变基因的近端和远端CpG 岛的甲基化水平对该基因转录的影响，发现近端CpG岛的甲基化水平与精子发生有关；采用TALEN靶向基因操作技术进行体外细胞研究，发现DDX3Y基因影响小鼠精原细胞的分化和凋亡；用RNA干扰试验，发现DDX3Y基因沉默后精原细胞增殖受抵制抑，凋亡增加，精子发生显著下降，并影响子代数量。此外，我们还在以上实验的基础上增加了条件性基因敲除实验，目前动物模型已经建立，后续实验正在进行之中。本研究发现DDX3Y的突变及表观遗传学的改变可能影响精子发生，认为该基因是影响精子发生的重要基因之一。