一种新型生物传感器的构建及对饮用水中壬基酚的检测

利用基因重组将能发生易观察的生物学信号报告基因绿色荧光蛋白（GFP）与壬基酚的反应原件基因片断共同整合到细胞中，构成稳定表达的重组细胞系。壬基酚诱导稳定转染绿色荧光蛋白表达，然后建立荧光强度和对应物质浓度关系的线性关系，可通过检测发光强度来反应壬基酚，这样对壬基酚快速筛选。然后可通过应用免疫测定法和传感技术相结合的方法，在含有壬基酚的环境样品中，加入GFP标识的抗原，标记抗原和非标记抗原均竞争地与传感器上的抗体膜结合到固定表面上，将抗原或抗体固定在传感器基体上，通过传感技术使吸附发生时产生物理、化学及光学上的变化，通过检测荧光信号来测定样品壬基酚的浓度。因而本项研究可为饮用水中有机污染物在线连续和应急监测提供一种新方法，推动生物传感器的发展。

壬基酚是一种内分泌干扰物。基于壬基酚的检测方法一般采用 GC-MS，HPLC-MS。样品预处理有液一液萃取，固一液萃取，固相萃取，固相微萃取等方法，当前主要采用固相萃取方法。搅拌棒吸附萃取（SBSE）技术是近年来发展起来的一种新型的样品前处理技术，该技术集采样、萃取和浓缩于一体，无需其它的样品制备过程。萃取时吸附搅拌棒自身完成搅拌，与固相微萃取（SPME）相比，避免了搅拌子的竞争吸附。由于固定相涂层相对较厚，因此，萃取率也相对较高，适合样品中痕量组分的分析。本研究的主要目的就是制备出一种能够对壬基酚进行快速检测的方法。将合成人雌激素反应元件 (ERE)核心片断并将其插入 pGADD153一GFP，构建得到载体pERE-GFP, 并转染到SPC-A1细胞，建立一含重组质粒的稳定细胞珠，据此我们使含绿色荧光蛋白的报告基因表达与壬基酚呈剂量-反应关系。构建了一种基于乙炔黑／壳聚糖膜修饰电极的壬基酚电化学测定方法，将该修饰电极应用于三角湖水样中壬基酚的电化学测定，结果令人满意。我们探索了漆酶固定在十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）修饰的碳糊（CP）电极上，构建的稳定、灵敏的酶电化学传感器对壬基酚的电化学响应。我们实验研究壬基酚对肝细胞 L-02 毒性作用，壬基酚对泥鳅的毒性及可能机制，为深入了解壬基酚的健康危害效应提供依据。