生物活性肽抑制胃癌干细胞的作用和机制研究

我国胃癌的发病率近年来仍然居高不下，而内蒙古自治区是我国胃癌的高发区。目前对胃癌治疗的三大传统方法都有其局限性，寻找新型有效且副作用小、靶向性强的治疗方法一直是胃癌治疗、研究的一个重要方向。肿瘤干细胞是肿瘤组织中存在的少量肿瘤细胞，具有自我更新和分化的潜能，是肿瘤增殖生长，转移和复发的根源，是目前研究的热点。基于获得自主知识产权及前期研究的基础上，本课题拟对抗癌活性肽单体成分开展抗胃癌干细胞的研究：（1）流式细胞术分选高纯度的胃癌干细胞；（2）在体外及动物体内研究活性肽单体成分抗肿瘤生物效应；（3）miRNA芯片检测相关基因；（4）以人胃癌标本进行验证。本项研究结果有助于阐述抗癌活性肽单体对胃癌干细胞的作用及其分子机制，为临床应用奠定理论基础。

根据计划任务书内容以及追踪国内外抗肿瘤生物活性肽研究进展,初步阐明了来源于动物脏器的生物活性肽抑制胃癌干细胞的作用及机制。拓展了研究工作，获得了较好的成果,为进一步深入研究奠定了基础。采用细胞学、现代分离纯化技术、动物学，以及分子生物学技术展开研究。.（1）首先应用蛋白质组学的研究手段初步分析ACBP-3的主要组成成分；.（2）采用流式细胞术分析了MKN45细胞中CD44 阳性细胞的比例，分选CD44 阳性细胞和阴性细胞，在特殊的干细胞培养条件下成功培养。球形克隆（spheroid colony, SC）细胞接种NOD/SCID鼠成功致瘤。.（3）不同浓度的ACBP-3处理MKN45细胞，FCM分析了处理后的MKN45细胞中所含的CD44阳性的比例变化。.（4）持续低浓度ACBP-3作用于SC细胞，观察了细胞形成克隆的能力变化；用6种不同浓度的ACBP-3、3个不同的作用时间作用于SC细胞，观察了细胞增殖能力的变化；.（5）扩展工作：①ACBP-3处理后的SC细胞接种于NOD/SCID鼠，分别用ACBP-3，以及顺铂，ACBP-3联合顺铂治疗（扩展工作），初步观察了抑瘤效果；②探讨了ACBP对人胃癌细胞MKN74的增殖抑制作用（方法同MKN45）。.结果：.1、ACBP-3主要由6种物质组成。.2、 MKN45细胞系中，CD44阳性的比例平均为90.6%。 ACBP-3处理的剂量和CD44阳性的比例呈负相关关系及剂量依赖性的特点。.3、CD44阳性细胞只有15% 的细胞具有形成SC的能力，.4、SC细胞在NOD/SCID鼠致瘤性强，HE染色和电镜下显示肿瘤呈现恶性程度高的形态学特征。而CD44阴性的细胞接种小鼠后未成瘤。.5、持续低浓度ACBP-3处理SC细胞未形成细胞克隆，对照克隆为85% ～90%。.6、ACBP-3抑制SC细胞的增殖，呈时间和剂量依赖，抑制率达41.6%。，且ACBP-3处理后的SC细胞致瘤时间延长。.7、与对照组相比，大剂量的ACBP-3对正常BALB/C 小鼠无明显毒副作用。.8、ACBP-3单独或与顺铂联合进行荷瘤小鼠治疗，均呈现抑制肿瘤生长的作用。与顺铂组比较，单用ACBP-3以及二者联合用药（顺伯剂量减半量），达到抑瘤效果较单用顺铂时强，小鼠的体重下降程度均小于单用顺铂组的小鼠。.9、ACBP-3对MKN74细