基于eNOS-NO信号通路研究玉郎伞MHBFC逆转压力超负荷心室重构的调控机制

Pressure-overload induced ventricular remodeling can lead to ventricular systolic and diastolic dysfunction, which are the important factors leading to myocardial infarction and heart failure, and how to regulating the eNOS-NO pathway to reverse ventricular remodeling is the focus of the recent research. We had firstly separated the 17-methoxyl-7-hydroxyl-benzofuran chalcone (MHBFC) from Guangxi characteristic medicinal herb Yulangsan. Previous study has confirmed that MHBFC activated the eNOS-NO pathway and prevented the pressure overload-induced progression of cardiac hypertrophy to cardiac failure. But the way which MHBFC activated eNOS-NO pathway is deserved to further study. In this study, firstly, the pressure-overload rat model will be used, the hemorheology and the level of NO will be observed, the RT-PCR and Western-blot techniques will be used to detect genes and proteins that related to eNOS-NO signaling pathway. Secondly, the eNOS knockout mice by pressure-overload will be used, the hemodynamics, cardiac index and pathological changes of myocardial tissue will be observed, the RT-PCR will be used to detect the marker genes that related to myocardial hypertrophy. Based on these studies, the molecular mechanism of MHBFC reverse pressure-overload induced ventricular remodeling based on the eNOS-NO pathway will be revealed, which will provid the experimental evidence and theoretical support for further development of MHBFC on reversing cardiovascular remodeling.

压力超负荷心室重构可导致心室的收缩及舒张功能障碍，是心肌梗塞、心衰死亡的重要因素，而如何通过干预eNOS-NO信号通路，逆转心室重构是目前研究热点。我们首次从广西特色药材玉郎伞分离出17-甲氧基-7-羟基-苯并呋喃查尔酮（MHBFC），证实其逆转大鼠压力超负荷心血管重构作用与激活eNOS-NO通路有关，但其对通路的激活方式有待深入研究。本研究拟采用大鼠压力超负荷心室重构模型，检测血液流变学和NO；电镜观察心肌微血管内皮细胞凋亡及形态学；RT-PCR和Western-blot检测心肌组织和微血管内皮细胞eNOS-NO 信号、相关基因与蛋白表达。采用eNOS基因敲除小鼠压力超负荷心室重构模型，观察血流动力学，心脏指数及心肌组织病理学，RT-PCR检测相关肥厚基因表达。通过上述实验从eNOS-NO信号通路考察MHBFC逆转心室重构的分子调控机制，为MHBFC开发应用提供实验依据和理论支持。

压力超负荷心室重构可导致心室的收缩及舒张功能障碍，是心肌梗塞、心衰死亡的重要因素，而如何通过干预eNOS-NO信号通路，逆转心室重构是目前研究热点。我们首次从广西特色药材玉郎伞分离出17-甲氧基-7-羟基-苯并呋喃查尔酮（MHBFC），证实其逆转大鼠压力超负荷心血管重构作用与激活eNOS-NO通路有关，但其对通路的激活方式有待深入研究。本项目采用大鼠压力超负荷心室重构模型，检测血液流变学和NO；电镜观察心肌微血管内皮细胞凋亡及形态学；RT-PCR和Western-blot检测心肌组织和微血管内皮细胞eNOS-NO 信号、相关基因与蛋白表达。采用eNOS基因敲除小鼠压力超负荷心室重构模型，观察血流动力学，心脏指数及心肌组织病理学，RT-PCR检测相关肥厚基因表达。结果表明：MHBFC通过增加PI3K和Akt蛋白磷酸化及PI3K和Akt基因表达，增加eNOS蛋白磷酸化及eNOS基因表达，激活eNOS-NO信号通路，提高eNOS酶活性，催化生成保护性的NO，改善血液流变学，对抗心室重构引起的心肌微血管内皮细胞（MMVEC）凋亡，从而对心肌损伤产生保护作用，逆转心室重构。MHBFC 12，24 mg/kg具有明显逆转野生型小鼠心室重构的作用，但是对逆转eNOS基因敲除小鼠心室重构的效果不明显。MHBFC逆转心室重构的作用机制与eNOS基因有关，其对小鼠心室重构的逆转作用依赖于eNOS基因。通过上述实验从eNOS-NO信号通路阐明了MHBFC逆转心室重构的分子调控机制，为MHBFC开发应用提供实验依据和理论支持。