通过新技术D50检测CDR3免疫多样性及其预测高危型HPV持续感染和宫颈上皮内瘤变风险的作用研究

Currently, the lack of biomarker to predict the risk of HR-HPV persistency and CIN progression leads to a large number of unnecessary colposcopy and overtreatment. Previous studies indicated that T cell repertoire diversity may be used as a valuable biomarker for the risk prediction of HPV infection and CIN. In this study , we will simulate the natural history of cervical cancer, and use ARM-PCR and high-throughput sequencing technologies as well as a simple measurement (D50) to evaluate the CDR3 diversity in different cervical lesions .We will also follow up the HPV positive and CIN1patients at a 6-month and 12-month interval. According to the results from the baseline and follow-up, the potential role of CDR3 D50 in predicting HPV persistence and CIN1 progression will be explored. Results from this study will be valuable to help finding molecular markers to triage women who are unnecessary to undergo colposcopy and treatment. Moreover, this study will also illustrate the T cell immune diversity in the role of HPV natural clearance and CIN transformation and provide important information for the development of therapeutic vaccines in China.

目前宫颈癌筛查缺乏预测高危型HPV持续感染和CIN进展风险的评价指标，导致大量不必要的阴道镜转诊以及CIN过度治疗。既往研究提示T细胞免疫多样性可能是一项预测HPV感染和CIN风险的有效指标。本研究将模拟宫颈癌发生的自然进程，运用改进后的扩增子拯救多重PCR/第二代高通量测序技术以及全新的D50免疫多样性评价指标，分析不同病变间CDR3免疫多样性的差异。建立随访队列，对HPV和CIN1组分别在第6月和第12月进行2次随访，根据基线和随访的结果，探索CDR3 D50是否具备预测高危型HPV持续感染和CIN1进展风险的潜力。本研究结果将为寻找HPV感染和CIN1人群分流的分子标记物，避免不必要的阴道镜转诊和CIN过度治疗产生重要意义。同时，本研究将为阐明T细胞免疫多样性在HPV自然清除和CIN转归中的作用机制提供重要实验依据，为我国开发宫颈癌治疗性疫苗提供重要参考。

研究目的 .本研究模拟宫颈癌自然发病过程，应用新技术D50检测CDR3免疫多样性，对CDR3是否具备预测高危型HPV持续感染和CIN风险进行了前瞻性探索。.研究方法.我们招募了 5组，共26名年龄在30~64周岁的妇女作为研究对象，包括正常对照3例、HR-HPV感染8例、CIN1 6例、CIN2/3 4例、宫颈癌5例。所有研究对象签署知情同意书后，我们对她们进行了液基细胞学检查和HPV DNA检测。收集研究对象的外周血后完成T细胞分离，通过ARM-PCR和第二代高通量测序技术检测CDR3。依据病理诊断作为金标准，分析不同研究组间CDR3免疫多样性的差异。此外，对研究对象进行了细胞学诊断和HPV检测。所有HPV阳性和CIN 1妇女没有治疗，依据CDR3结果建立随访队列，在12个月后进行液基细胞学、HPV DNA检测完成随访。.研究结果.正常、HPV阳性、CINI、CIN II-III、宫颈癌组中CDR3分别为9.2±7.9，5.6±5.6，4.0±6.0，13.6±7.7，8.0±7.6。我们将研究对象分为LSIL组（HPV阳性和CIN I）和HSIL组（CIN II-III和宫颈癌），结果提示两组间CDR3多样性有统计学意义（P<0.05）。我们对诊断为HPV阳性的7例研究对象进行了1年的随访。其中4人HPV持续感染，3人转为阴性。两组间没有统计学差异(P=0.173)。我们对诊断为CIN 1的6名研究对象进行了1年的随访。使用细胞学检查完成随访，其中5人细胞学检查正常，1人诊断ASC-US，转诊阴道镜未见异常。因例数太少，两组间无法进行统计学差异评价。.研究结论. CDR3多样性表达可能是HR-HPV持续感染的一种危险因素。CDR3尚无法被认为可作为生物标记物预测HPV阳性的转归。CDR3可能在CIN1的转归中发挥重要作用。CDR3多样性较低的CIN 1妇女可能需要应该接受更加频繁的密切随访。