miR-155调控Th17发育分化促进IL-17分泌参与类风湿关节炎发病的分子机制研究

IL-17在类风湿关节炎（RA）发病中起着关键作用。 miR-155是正常免疫功能所必需的miRNA（微小RNA）分子，公认是免疫系统中心调控者，目前研究表明其在Th17发育分化过程中扮演重要角色。Ets-1是Th17亚群分化产生IL-17的重要负性调控因子，生物信息学分析及实验均证实 Ets-1也是miR-155的靶基因。课题设计通过检测RA患者和健康对照者的外周血CD4+细胞中miR-155、靶基因Ets-1和IL-17及相关基因的mRNA和蛋白表达，从而探究在RA发生中，miR-155及Ets-1与IL-17的相互作用关系；应用体外细胞实验验证miR-155通过下调Ets-1促进产生IL-17；而体内动物试验进一步阐明miR-155可通过下调靶基因Ets-1的表达来促进Th17细胞分化产生IL-17参与RA的发病机制，最终为阐明miR-155在RA发病中的作用机制提供可靠的实验依据。

目的：阐明miR-155可通过下调靶基因Ets-1的表达来促进Th17细胞分化产生IL-17参与RA的发病机制。.方法：分别在临床标本水平、体外细胞培养水平和体内CIA动物模型水平检测miR-155、IL-17、Ets-1及相关基因的表达。.结果：miR-155和miR-146a在RA组CD4+T细胞中的相对表达水平高于对照组（1.97倍和1.94倍，P <0.05）；IL-17A、STAT3、 RORγt 和IL-23在RA组CD4+T细胞中的相对表达水平高于对照组（分别为2.05倍、1.68倍、1.91倍和3.07倍，P <0.05）；而Ets-1在RA组CD4+T细胞中的相对表达水平低于对照组（0.51倍，P <0.05）；miR-155与IL-17A、STAT3、 RORγt 和IL-23的mRNA表达呈正相关，与ETS-1呈负相关，P <0.05；而miR-146a的表达与这些基因的表达不相关。体外细胞培养结果，对照未刺激组几乎不表达和分泌IL-17，对照刺激组表达IL-17的细胞和分泌IL-17增多；miR-155过表达组表达IL-17细胞百分比和分泌IL-17水平明显高于对照刺激组和miR-155抑制组，P<0.01；miR-155过表达组miR-155、IL-17A mRNA高表达，Ets-1 mRNA低表达，与其他三组相比P<0.05，差异有显著性意义；miR-155过表达组的ETS-1的蛋白表达水平下降，而miR-155抑制组的ETS-1的蛋白表达水平上升。在动物模型中，LV-miR-155组最早出现关节炎表现，关节炎指数最高，CD4+T细胞的数量和比例最多，在小鼠胸腺、脾和淋巴结组织中，IL-17、IL-23等基因的mRNA表达和蛋白表达高于其它五组，Ets-1的表达低于其它五组；而在LV-miR-155 inhibitor组出现相反的结果。结论：miR-155可通过下调Ets-1的表达来促进Th17细胞分化产生IL-17来参与类风湿关节炎的发生发展。