神经母细胞瘤诱导多能干细胞模型的建立和发病机制的研究

Neuroblastoma (NB) is the most common extracranial solid cancer in childhood. It's hard to diagnose early , and the incidence is high and has no effective treatment.It is a neuroendocrine tumor, arising from the sympathetic nervous system (SNS). It is widely accepted that the cell of origin for neuroblastoma arises from the sympathoadrenal cell lineage of the neural crest during development. Familial NB is caused by rare germline mutations in the anaplastic lymphoma kinase (ALK) gene mainly, but the pathogenesis of NB is not well. It will contribute to cure the NB and the related diseases of SNS to make clear the pathogenesis of the NB. The applicant has generated NB patient-specific induced pluripotent stem cells (iPSCs) by cell reprogramming, based on this, plan to induce iPS cells to differentiation to sympathoadrenal cell lineage via neural crest cells, in order to modeling the disease pathology process and exploring the underlying mechanism.This research will tribute to the establishment of human patient-specific models, which make it possible to cure these diseases using gene therapy.

神经母细胞瘤（neuroblastoma，NB）是儿童最常见的颅外肿瘤，该病早期难以发现，发病率高且无特效疗法。NB是起源于胚胎性交感神经系统的恶性肿瘤, 目前国内外大多数学者认为主要是因为胚胎期神经嵴向交感神经细胞系分化受阻导致的。家族型NB被证明与间变淋巴瘤激酶（anaplastic lymphoma kinase，ALK）的体细胞突变所导致，但其具体发病机理不明。厘清NB发病机制既利于NB有效防治，又利于进一步探讨如何治疗相关神经系统疾病。申请人在已建立NB诱导多能干细胞模型基础上，拟通过体内外诱导其经神经嵴细胞向交感神经细胞系分化建立疾病模型来研究其发病机制。通过本课题的研究，有助于人类疾病细胞模型建立，为进一步探索疾病的发病机制及其防治奠定基础。

神经母细胞瘤（neuroblastoma，NB）是儿童最常见的颅外肿瘤，该病早期难以发现，发病率高且无特效疗法。NB是起源于胚胎性交感神经系统的恶性肿瘤, 目前国内外大多数学者认为主要是因为胚胎期神经嵴向交感神经细胞系分化受阻导致的。家族型NB被证明与间变淋巴瘤激酶（anaplastic lymphoma kinase，ALK）的体细胞突变所导致，但其具体发病机理不明。申请人建立了NB诱导多能干细胞系（NB-hiPSCs），并通过了多能干细胞生物学特性及体内外向三胚层分化潜能，建立疾病模型。通过在不同时间通过不同诱导液（N2B27+bFGF+EGF），应用悬浮培养和Fibronection贴壁培养的方法可以诱导hiPSCs高效的向神经系统分化，诱导hips细胞可以形成大量玫瑰花环Rossette，进而分化得到的神经嵴细胞表达SOX10和P75,可以分化为神经元、胶质细胞、成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞和平滑肌细胞，通过本课题的研究，有助于人类疾病细胞模型建立，为进一步探索疾病的发病机制及其防治奠定基础。. 建立表达多能干细胞组织特异性启动子Nanog 同时携带荧光报告基因和抗生素筛选基因的慢病毒表达载体Puro-Nanog-hrGFP，将其成功导入小鼠ES细胞,并并通过诱导其分化，通过诱导其分化可观察到绿色荧光表达逐渐减弱，可通过其监控iPS细胞经神经嵴向神经元分化过程及进一步调控干细胞分化奠定基础，相关论文已于2016发表。. 通过通过靶向MDM2基因，探讨mir -509- 5p对胰腺癌的抑制作用，通过cck-8、Transwell和抑瘤实验研究发现，mir -509- 5p影响了胰腺癌细胞的增殖、迁移与侵润，可以作为肿瘤抑制因子，进一步探讨其对神经母细胞瘤的抑制作用，相关研究成果已于2017年发表[OncoTargets and Therapy，SCI影响因子2.612]。