骆驼特异性重链抗体产生规律及其免疫乳的功能研究

Camel is the only ruminant mammal that can produce heavy-chain antibodies (HCAbs). HCAbs play an important role in the medical value of camel milk for adjuvant treatment of many diseases, such as diarrhea, gastrointestinal ulcers. The human enteric pathogenic bacteria will be selected as antigen to immunize camels and explore the producing regulation of specific HCAbs in the camel milk in this study. Meanwhile, the activities and biological characteristics of HCAbs will be analyzed systematically in camel immune milk. This study will provide the basic data and theoretical guidance for developing camel immune milk and improving the value of camel as well.

骆驼是唯一分泌重链抗体(HCAbs)的反刍哺乳动物。HCAbs是驼乳对腹泻、胃肠道溃疡等多种疾病具有疗效的重要因子。本研究拟选用人肠道病原菌作为抗原免疫骆驼，比较骆驼血液与乳中HCAbs的分泌情况，探索骆驼产生特异性重链抗体滴度变化规律，系统分析免疫驼乳中HCAbs的生物学特性，为免疫驼乳的研究开发及提高骆驼价值，提供重要基础数据和理论指导。

驼乳因具有治疗许多疾病的潜力而闻名。据研究表明，驼乳中含有丰富的具有抗菌和保护特性的蛋白质，如溶菌酶，乳过氧化物酶，乳铁蛋白和免疫球蛋白等。骆驼免疫球蛋白不同于其他已知动物的免疫球蛋白，骆驼体内除了含有常规四聚体IgG1外，还含有天然缺失轻链的重链抗体（IgG2, IgG3）。这些重链抗体尽管缺失轻链，但是作为抗体的功能是完整的。与常规抗体相比，重链抗体具有许多特性，它具有更小的分子质量，更高的稳定性，更强的亲和能力和溶解性，并参与许多生物过程，因此在各种生物技术和医学领域中发挥重要的作用。目前，重链抗体的大多研究主要集中于骆驼血液，而对于驼乳中重链抗体的研究较少。因此，本课题计划选用人肠道致病菌制备灭活疫苗定期免疫骆驼获得了高特异性抗腹泻免疫驼乳(1:1000)及驼血(1:5000)，采用Protein A/G 亲和层析法成功分离纯化了免疫驼乳及血清中的各抗体亚型，并对免疫前后各抗体亚型的抗原结合特性进行了系统分析，结果发现免疫乳清及免疫血清中各抗体效价高达1:64000。之后，对各抗体亚型进行了温度、pH及体外消化稳定性的研究，发现重链抗体IgG2与IgG3较常规抗体IgG1而言具有高稳定性。通过体外抑菌试验发现，除免疫乳IgG2外，其余抗体较未免疫抗体而言，均能在一定程度上破坏鼠伤寒沙门氏菌细胞结构，降低菌株的活力。基于此，本项目进一步对免疫驼乳与未免疫驼乳对鼠伤寒沙门氏菌感染小鼠的治疗作用进行了比较分析，目前正在整理试验结果。除此之外，本项目基于驼乳IgG3开发了驼乳掺假检测试纸条。结合上述结果，本研究为今后免疫驼乳的研究开发及提高骆驼价值，提供重要基础数据和理论指导。