非病毒诱导多能干细胞作为核糖体区打靶载体靶细胞及其在血友病A基因治疗中的应用

基因治疗将是21世纪临床医学产生重大突破的领域，iPS细胞的研究成功为基因治疗提供了更有研究潜力的靶细胞。我们拟在我室已构建的新型非病毒基因打靶载体- - 核糖体基因区打靶载体（pHrneo）的基础上，通过非病毒载体介导OCT4, SOX2, KLF4,以及c-MYC四个基因进入人皮肤成纤维细胞内，并在小分子的共同诱导下，引发皮肤成纤维细胞基因组发生重新编程而诱导出多能干细胞（iPS细胞）。我们再通过核糖体基因区打靶载体将FⅧ基因定点靶入到iPS细胞的核糖体基因区进行有效表达。经过体外培养扩增，将定点整合细胞定向诱导为肝内皮细胞，然后移植到血友病A模型小鼠中进行体内实验的研究。本课题将为采用ex vivo（间接体内） 途径进行血友病A基因治疗的临床试验奠定良好的基础，同时为利用病人自身来源的iPS细胞作为非病毒载体的靶细胞进行单基因遗传病基因治疗提供新的思路。