CD147对类风湿关节炎中性粒细胞功能的影响及其机制

Rheumatoid arthritis (RA) is a disabling, deadly and common autoimmune disease which is a combination of inflammatory cells and cytokines involved, but traditional theory dominated by T, B cells can not completely explain the pathogenesis of RA. With deepening understanding of neutrophils, effectively inhibit neutrophil aggregation, invasion ability and proliferation of RA synovial cells have become a hot research point and development trend. On the basis of our previous research that highly-expressed CD147 on neutrophils of RA peripheral blood and synovial fluid affect their functionality, we propose to: ① Establish co-culture model of neutrophils and RA synovial cells to observe the role of CD147 on neutrophil's chemotaxis, adhesion ability, secretion of MMPs and invasion function before or after co-culture; ② Observe the effect of down-regulation of CD147 to these functions using RNAi method; ③ Clarify the internal mechanism of CD147's function to the neutrophils from "calcium flicker" and signaling pathways; ④ Explore the effect of CD147 monoclonal antibody on neutrophil's function and mechanism of the antagonistic effect through building severe combined immunodeficient mice-human RA grafts (SCID-HuRAg) model. This study go deep into previous research that CD147 affects functions of RA neutrophil, further research will help elucidate the pathogenesis of RA which is expected to open up new ideas to explore novel treatment strategy for RA.

类风湿关节炎（RA）是由多种炎细胞和细胞因子参与发病，可致残、致死的常见疾病；但是以T、B细胞占主导的传统理论尚不能完全解释RA发病机制。而有效抑制中性粒细胞聚集及RA滑膜细胞的增殖侵袭正逐渐成为RA研究的热点和发展趋势。本项目组在前期发现CD147在RA外周血及滑液中性粒细胞高表达并影响其功能的基础上，拟：①建立中性粒细胞和RA滑膜细胞共培养模型，观察CD147对中性粒细胞趋化、粘附，共培养后MMPs分泌及侵袭等功能的影响；②借助RNAi手段研究CD147表达下调对上述功能的影响；③从"钙闪烁"及信号通路等角度阐明CD147发挥功能的内在机制；④构建联合免疫缺陷鼠-人RA移植物嵌合模型（SCID-HuRAg），探讨CD147单抗对中性粒细胞功能的拮抗效果及作用机制。本研究是对既往CD147影响RA中性粒细胞功能研究的进一步深入，有助于阐明RA发病机制，有望为探索RA新型治疗策略开辟思路。

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis, RA）是一种以滑膜增殖和骨质破坏为主要特征的慢性炎性疾病。在RA关节腔内存在大量的炎细胞，其中滑液中含量最丰富的细胞是中性粒细胞，它的代谢产物水平可以作为反映病情活动度的指标之一。CD147分子，是一种分子量约在57 KD左右的跨膜糖蛋白，因其在促进MMPs分泌中具有重要意义，也被称为胞外基质金属蛋白酶诱导剂（extracellular matrix metalloproteinase inducer, EMMPRIN）。为了观察CD147分子在中性粒细胞表面的表达水平及其功能，本项目进行了以下研究。.1．CD147在RA滑膜细胞表面阳性表达率高于骨关节炎（osteoarthritis, OA）滑膜细胞对照组。自RA滑液中分离的中性粒细胞CD147表达的MFI量较自RA外周血中分离的中性粒细胞显著增高。.2．CyPA介导的趋化作用在诱导分化后HL-60细胞中较诱导分化前增加明显。在加入抗CD147抗体组中趋化数目降低明显。.3．明胶酶谱和ELISA结果均显示RA FLS中MMPs的表达量较OA FLS对照组显著增加。经抗CD147抗体作用后，MMPs表达量显著降低。.4．明胶酶谱和ELISA结果显示RA FLS与RA外周血中性粒细胞或健康对照者外周血中性粒细胞共培养后，MMPs表达量均较RA FLS单独培养组显著增加；且与RA外周血中性粒细胞共培养组增加更明显。.5．侵袭实验证实RA FLS侵袭数目较OA FLS对照组显著增加，与诱导分化后HL-60共培养后侵袭数目较诱导分化前显著增加，且均较RA FLS单独培养组增加明显。RA FLS与RA外周血中性粒细胞共培养后较与健康对照者外周血中性粒细胞共培养组相比，侵袭数目显著增加。.6．胞内钙离子测定及粘附实验表明经CyPA刺激后，胞内Ca2+浓度及细胞粘附能力显著增加，加入CD147单抗后这种作用被阻断，Western blot结果提示可能与脂筏层中TRPM7蛋白发挥功能有关。.总之，我们的研究发现在RA中性粒细胞高表达的CD147分子可能与CyPA介导的中性粒细胞趋化，RA FLS的MMPs分泌及其侵袭能力有关，上述功能均与RA软骨侵袭及骨质破坏密切相关。通过CD147单抗阻断其作用可能是RA新型治疗策略中的一个潜在靶点。