从细菌生物膜角度探讨清热败毒合剂在创面修复过程中的作用及机制

Bacterial infection is one of the main factors affecting wound healing.The bacterial biofilm takes an important part in antibiotic resisitance and bacteria resistant to the immune system. The bacterialquorum sensing system is regarded as the key link in the process of biofilmformation, influences the formation and dissociation of biofilm directly;currently as the only known transmission molecule within interspecific orIntraspecific bacteria, self-induced signal AI-2 plays a key role in the formationand homeostasis of the QS system. After the formation of biofilm, the signalingmolecule it secretes will weaken the ability that antigen activates macrophages;lead wound tissue exposed to the ischemia and hypoxia environment, develop thehypoxia inducible factor, reduce the expression of VEGF, affect woundhealing.Based on the "rot off then muscle growth", "blood stasis off then freshblood growth" theory, it puts forward the academic point of view of "muscle growthvia rot off, fresh blood growth via blood stasis off". The oral Qingre Baidumixture with clearing heat and activating blood, is observed its effect onbacterial biofilm formation, quorum sensing system, self-induced molecular AI-2,macrophage, hypoxia inducible factor-vascular endothelial growth factor pathway,and its mechanism in promoting wound healing is revealed from the bacterialbiofilm.

细菌感染是影响创面愈合的主要因素之一。细菌生物膜的形成是细菌产生耐药和逃避机体免疫系统清除的重要原因。细菌密度感应系统是生物膜形成过程中的关键环节，直接影响生物膜的形成和解离；自诱导分子AI-2作为目前所知的唯一能进行细菌种内和种间信号传递的分子，对密度感应系统形成与稳态起关键作用。生物膜形成后，其分泌的信号分子会减弱抗原激活巨噬细胞的能力；导致伤口组织处于缺血缺氧的环境中，产生缺氧诱导因子，导致血管内皮生长因子表达降低，影响伤口愈合。基于“腐脱肌生”、“瘀祛新生”理论，提出“祛腐生肌、祛瘀生新”学术观点。通过口服具有清热活血作用的清热败毒合剂，观察其对细菌生物膜形态、密度感应系统、自诱导分子AI-2、巨噬细胞、缺氧诱导因子-血管内皮生长因子通路的调控，从细菌生物膜角度揭示清热败毒合剂在创面修复过程中的的作用及机制。

细菌感染是影响创面愈合的主要因素之一。细菌生物膜的形成是细菌产生耐药和逃避机体免疫系统清除的重要原因。细菌密度感应系统是生物膜形成过程中的关键环节，直接影响生物膜的形成和解离；自诱导分子AI-2作为目前所知的唯一能进行细菌种内和种间信号传递的分子，对密度感应系统形成与稳态起关键作用。生物膜形成后，其分泌的信号分子会减弱抗原激活巨噬细胞的能力；导致伤口组织处于缺血缺氧的环境中，产生缺氧诱导因子，导致血管内皮生长因子表达降低，影响伤口愈合。基于“痈疽原是火毒生，经络阻隔气血凝”的理论与慢性难愈性创面“因邪致瘀，瘀久化热，热盛肉腐”的病机特点，确立了“清热活血”的治疗原则。通过建立合并细菌生物膜感染的慢性难愈性创面动物模型，运用具有清热活血作用的院内制剂清热败毒合剂进行干预，采用哈氏弧菌BB170 生物发光法检测细菌AI-2 的产生，免疫组化、Elisa检测Hif-1a, Hif-2a, Hif-3a 和VEGF的表达水平，HE染色检测各组炎症水平，免疫荧光检测生物膜的形成，免疫荧光检测巨噬细胞水平。结果：清热败毒合剂一方面通过抑制自细菌诱导分子AI-2的水平，抑制了细菌生物膜的形成，促进肉芽组织生成，加速创面愈合，与阳性对照头孢哌酮和五味消毒饮相比有更好疗效。另一方面，清热败毒合剂可以诱导Hif-1a，Hif-2a和Hif-3a的表达，从而诱导了VEGF的表达，促进了血管新生，从而进一步促进创面愈合。本课题从细菌生物膜、巨噬细胞、缺氧诱导因子-血管内皮生长因子通路的角度揭示了清热败毒合剂促进创面修复的机制，进一步完善与发展了创面修复理论。