血小板凝血酶敏感蛋白－1(TSP-1)在低氧性肺血管重建中的作用

肺血管重建是低氧性肺动脉高压（HPH）形成的重要机制之一，其中肺动脉血管平滑肌细胞增生和肺动脉血管管壁细胞外基质沉积是肺血管重建的主要病理改变。血小板凝血酶敏感蛋白-1（TSP-1）具有促进血管平滑肌细胞、成纤维细胞有丝分裂、增生和细胞外基质合成等作用。本研究采用免疫组化、原位杂交、荧光PCR、细胞培养等方法，研究TSP-1在低氧大鼠肺内的表达和分布变化及其与肺血管重建的关系，低氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞和内皮细胞合成TSP-1的影响，TSP-1对大鼠肺动脉平滑肌细胞和成纤维细胞增殖的影响，以及TSP-1对大鼠肺动脉平滑肌细胞和成纤维细胞合成细胞外基质的影响，探索TSP-1与肺血管重建的关系及其在HPH发病过程中的作用。本项目首次观察TSP-1在低氧性肺动脉高压中的表达及其与上、下游因子之间的关系，对HPH防治策略的制定具有重要的理论和实践价值。

目的 观察低氧性肺动脉高压形成过程中大鼠肺组织中凝血酶敏感蛋白-1（TSP-1）的表达变化、低氧对离体培养的大鼠肺动脉内皮细胞分泌TSP-1的影响，TSP-1对体外培养的肺动脉内皮细胞和成纤维细胞增殖的影响及细胞外基质的影响，探讨TSP-1在低氧性肺动脉高压中的作用。.方法 （1）将20只雄性SD大鼠随机分为对照组和低氧组。以常压低氧复制肺动脉高压模型，检测mPAP；分别称量大鼠RV和LV+S的重量，计算出RV/（LV+S）；计算出WT%和（WA%）；原位杂交和免疫组化法观察肺TSP-1 mRNA及蛋白的表达，荧光PCR法观察TSP-1 mRNA的表达。（2）低氧处理离体培养的人肺动脉内皮细胞，给予EFGR刺激，观察低氧组肺动脉内皮细胞TSP-1的分泌情况。（3）体外培养大鼠PASMCs和FM，给予TSP-1处理，检测细胞增殖和细胞周期。（4）体外培养大鼠PASMCs和FM，给予TSP-1刺激，观察细胞表达Ⅰ型胶原和TGF-β的情况。（5）采用ELISA法测定血浆正常人和肺动脉高压TSP-1水平。.结果 （1）与对照组比较，低氧组大鼠mPAP升高、WT%、WA%以及RV/(LV+S)增加。低氧组大鼠肺组织TSP-1 mRNA表达明显上调，TSP-1蛋白水平明显增加。（2）与对照组相比，大鼠肺动脉内皮细胞在低氧培养6h后其TSP-1 mRNA即出现升高，低氧12h 后上述指标明显增加，24h后其增加则更加明显。给予EGFR刺激后，不同刺激时间肺动脉内皮细胞分泌TSP-1不同。（3）体外培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞和成纤维细胞，给予TSP-1刺激后，肺动脉平滑肌细胞和肺成纤维细胞增殖明显增加。（4）体外培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞和成纤维细胞TSP-1刺激后，Ⅰ型胶原和TGF-β明显增加。（5）ELISA法测定实验组血浆中TSP-1高于正常对照组。结论 （1）慢性低氧可以刺激TSP-1的合成和释放，TSP-1参与了低氧性肺血管重建过程。（2）低氧可以刺激离体培养的大鼠肺动脉内皮细胞表达TSP-1 mRNA。（3）EGFR可刺激肺动脉内皮细胞合成和分泌TSP-1。（4）TSP-1可引起肺动脉平滑肌细胞和肺成纤维细胞增殖。（5）TSP-1可导致肺动脉平滑肌细胞和成纤维细胞细胞外基质增多。（6）COPD肺动脉高压患者血浆TSP-1增高。