基于TGF-β1/PI3K/Akt通路调控肝干细胞恶性转化探讨益脾养肝方抗肝癌前病变的机制研究

The precancerous lesion is the key process of hepatocellular carcinoma, and the malignant transformation of liver stem cell is one of the important events，study and blocking this malignant transformation can prevent the occurrence of HCC. Plenty studies suggest the inflammatory fibrosis microenvironment provide soil for malignant transformation of liver stem cells. As the most effective fibrosis factor in the liver, TGF-β1 may participate in the activation, expansion and malignant transformation of liver stem cells via PI3K/Akt pathway. Our previous researches show that YiPiYangGanFang having good effect against precancerous lesion. It can alleviate the pathological morphology and inflammation of precancerous lesions induced by DEN. But the mechanism is not clear. By establishing the model of precancerous lesion of rat and culture system of liver stem cell，this study is to discuss the regulation of the TGF-β1/PI3K/Akt on the malignant transformation of liver stem cell，and whether YiPiYangGanFang can inhibit the malignant transformation of liver stem cell via TGF-β1/PI3K/Akt pathway. We intends to provide theoretical basis for clinical application of YiPiYangGanFang and new ideas and targets for the clinical prevention and treatment of HCC.

肝癌前病变是肝癌发生的一个关键节点，其中肝干细胞的恶性转化是肝癌前病变的重要事件之一，研究并阻断其恶性转化可降低肝癌发生率。大量文献显示炎症纤维化微环境为肝干细胞恶性转化提供土壤，TGF-β1作为肝脏中最有效的纤维化因子可能是通过PI3K/Akt参与肝干细胞的活化、扩增以及恶性转化。前期研究证实益脾养肝方可改善DEN诱发的大鼠肝癌前病变组织的病理形态和炎症情况，具有良好的抗肝癌前病变的效果，但作用机制不明。本课题拟通过构建大鼠肝癌前病变模型和肝干细胞培养体系，从组织、细胞、分子等多个层面检测肝干细胞恶性表型及TGF-β1/PI3K/Akt通路各因子的表达，探究TGF-β1/PI3K/Akt通路对肝干细胞恶性转化的调控，及益脾养肝方是否通过TGF-β1/PI3K/Akt通路调控肝干细胞恶性转化发挥抗肝癌前病变作用，为该方临床应用提供理论依据，也为HCC的临床防治提供新的思路和靶点。

肝癌前病变是肝癌发生的一个关键节点，其中肝干细胞的恶性转化是肝癌前病变的重要事件之一，研究并阻断其恶性转化可降低肝癌发生率。炎症纤维化微环境为肝干细胞恶性转化提供土壤，TGF-β1作为肝脏中最有效的纤维化因子可能是通过PI3K/Akt参与肝干细胞的活化、扩增以及恶性转化。益脾养肝方是防治肝硬化进展的验方，前期研究发现该方对肝癌前病变亦有抑制作用。本课题通过构建大鼠肝癌前病变模型和肝干细胞培养体系，从组织、细胞、分子等多个层面检测肝干细胞恶性表型及TGF-β1/PI3K/Akt通路各因子的表达，探究TGF-β1/PI3K/Akt通路对肝干细胞恶性转化的调控，及益脾养肝方是否通过TGF-β1/PI3K/Akt通路调控肝干细胞恶性转化发挥抗肝癌前病变作用。细胞实验结果显示益脾养肝方可有效抑制WB-F344细胞的迁移、增殖和克隆形成能力，并下调p-Akt和CD133的表达，提示益脾养肝方可抑制肝干细胞恶性转化。动物实验结果显示益脾养肝方可改善肝癌前病变大鼠肝脏病理形态，减少胶原沉积、肝脏指数、ALT、AST，提高Alb水平，可抑制大鼠肝癌前病变组织中GST-Pi和AFP蛋白的表达，提示益脾养肝方可改善DEN诱导的肝癌前病变；益脾养肝方可抑制肝癌前病变组织中TGF-β1、OV6蛋白及EpCAM、CD133、CD90mRNA的表达，抑制大鼠肝脏组织Akt、PI3K、mTOR的磷酸化，提示益脾养肝方可通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制肝干细胞恶性转化发挥作用。本研究为肝癌前病变恶性转变的更深层的机制探索和中医药防治肝癌的思路和方法创新提供借鉴。