近岸污染区半知菌优势种PCR-DGGE指纹图谱与ITS特异探针与污染程度和变化相关性的研究

近海污染监测与治理是目前国家的重大技术需求，生物监测是其中不可缺少的研究内容。半知菌是目前报道的在海洋生境分布最广泛、种类最多的海洋真菌，作为真核微生物，不但其生命模型与高等生物较相似，而且半知菌对环境变化的反应差别也较大，一部分适应能力很强，当海洋生态系统遭受某种破坏时，它们会以其顽强的适应能力和极快的繁殖速度．迅速调整群体结构形成一定的优势种维持新的动态平衡，另一部分则反应敏感，当污染超过其机体忍耐程度时，可通过形态、色素、酶的变化较直观的表现出来。课题组将在原有的污染理化监测和半知菌生物、生态学研究的基础上，采用 PCR-DGGE指纹图谱技术分析近岸污染区不同点位半知菌优势种群体多样性与对应污染类型、程度的动态变化，结合优势种个体ITS特异探针与污染程度相关性的研究，为半知菌在海洋环境污染监测中的应用奠定基础

首先用理化方法对已选定的3个试验站位的污染物（重金属、PAHs、氮、磷、）进行4个季节时空动态变化检测分析，证明污染物随着站位与时间变化较大，在夏秋两季较高，在春季和冬季稍低，时空变化总趋势还是李村河入海口污染最重，属重度污染；海泊河入海口属中度污染；石老人近海污染最轻，属轻度污染。.采用DGGE指纹图谱技术对上述典型污染海域半知菌多样性时空变化与生境的关系进行研究，首次发现在这些污染海域半知菌普遍存在，并与污染程度不同形成明显的对应关系。半知菌数量和种类在轻度与中度污染范围内，随着污染的加重而增加，在重度污染海域，污染物的增加将导致半知菌数量和种类下降。结合传统的分离培养技术对半知菌群体结构的调查，证明半知菌群体以青霉属Penicillium为绝对优势种类。.选出的2株青霉指示菌株（Penicillium griseofulvum，Penicillium oxalicm）对污染物尤其是重金属变化反应敏感，其形态和色素对污染的程度具有较好的指示作用，通过ITS 序列差异及特殊酶基因（Isoamyl Alcohol Oxidase，IAO）设计了2个特异性强的基因探针，利用套式 PCR检测靶标真菌的灵敏度可达10 fg/μL，比传统测试方法提高了103倍，并成功完成污染海域的检测。.经课题资助在国内外学术期刊发表文章11篇，其中SCI收录刊物6篇，申请国家发明专利2项，培养研究生5人，超额完成计划书的任务指标