自体血小板凝胶治疗糖尿病足溃疡中microRNA调控的时空异质性

The primary cause of non-traumatic amputation is diabetic foot ulcer，which is difficult to heal.Our previous study has demonstrated that the APG treatment may inhibited the expression of MMP-1 and MMP-2, stimulate TIMP-1 secretion by releasing TGF-β1 and then regulate the dynamic balance of MMPs/TIMP,which is the potential mechanism to promote wound healing.Our preliminary study show that the expression of miRNA-126 in the diabetic foot ulcer is up-regulated after the APG therapy, which was implied that epigenetic regulation may also play an important role in this process. This study is aimed to explore the diversity of miRNA regulation after the APG therapy on diabetic foot ulcer, which means miRNA regulation after APG therapy is present and is characterized with the time and spectrum heterogeneity of miRNAs regulation.We also want to prove that the APG regulates MMPs/TIMP balance by miRNA and then improves local microcirculation.The result of this study will provide the possibly potential targets for the therapy of diabetic foot ulcers.

糖尿病足溃疡愈合困难，是非外伤性截肢的首要原因。我们的前期工作证实富血小板凝胶（APG）可以通过释放TGF-β1，抑制MMP-1和MMP-2的表达，刺激TIMP-1的分泌，调节创面局部MMPs/TIMP达到一个新的平衡点，从而促进糖尿病难治性皮肤溃疡的愈合。前期预试验亦发现APG治疗后的糖尿病足溃疡局部miRNA-126的表达明显上调，局部经皮氧分压和血流灌注均得到显著性改善。故我们提出表观遗传学调控可能在糖尿病足溃疡的愈合中发挥了作用。本研究拟通过临床观察、动物模型验证及细胞生物学机制三方面来探讨APG治疗难治性糖尿病足溃疡中miRNA调控的多样性，即APG治疗中存在miRNA调控，这种调控作用具有时间和空间(表达谱)异质性；证实APG可能通过多种miRNA调控MMPs/TIMP平衡，进而改善创面微循环促进创面愈合。从而对现有研究带来新的解释，为糖尿病足溃疡的治疗需找新靶点提供理伦依据。

糖尿病慢性皮肤溃疡（DCCU）是渐进发生，但机制尚不明确。自体富血小板凝胶（APG）可以通过调节MMPs/TIMPs平衡，改变创面局部miRNAs表达促进DCCU的愈合。本研究通过建立巴马小型猪DCCU模型，探究其发生机制及以APG为治疗手段，评估其疗效并探究治疗机制。.本项目临床试验发现：1、APG治疗可以调控局部miRNAs的变化，诱导miRNA-21、miRNA-126、miRNA-210、miRNA-93的表达，抑制miRNA-155的表达；2、miRNA-126、miRNA-210的表达上调可以促进创面愈合；3、每一次APG治疗后创面局部miRNAs的表达量变化情况可能有所不同。本项目动物实验发现：1、经10月高脂高糖饮食诱导初步建立以肥胖、血脂异常、胰岛素抵抗为特征的代谢综合征（MetS）模型。2、对260份小型猪血清标本中的胰岛素含量分别进行了放射免疫法（RIA）和酶联免疫法（ELISA）检测，结论为RIA和ELISA相关性好（R=0.903），小型猪胰岛素水平检测可以用RIA替代价格昂贵的ELISA检测法。3、继续喂养至23.5月龄发现在MetS成模后，随着时间的推移，小型猪“健康”皮肤逐渐发生表皮厚度、Ⅰ型胶原含量、MVD及IDNFD降低，真皮厚度增加，部分出现病理改变。上述结构改变可能与MMPs/TIMPs失衡相关。4、其后经STZ诱导建立DCCU模型，结果DMCT与CT比较发现，DMCT溃疡愈合率较低（P<0.05）,溃疡愈合时间较长（51.6±5.8d vs 35.6±2.6d，P<0.05）；DMAPG和DMCT比较发现，DMAPG的溃疡愈合率较高（P<0.05），溃疡愈合时间较短（36.3±5.1 d vs 51.6±5.8d，P<0.05）；CT与DMAPG比较发现，CT的溃疡愈合率较高（P<0.05），溃疡愈合时间两者之间无统计学差异（35.6±2.6d vs 36.3±5.1d，P=0.491）。即糖尿病会降低慢性溃疡的愈合率，延长慢性溃疡的愈合时间；虽然愈合速度达不到正常慢性创面水平，但APG治疗可以明显缩短DCCU愈合的时间，甚至可以使其愈合时间与正常慢性创面愈合时间相当，并且在治疗过程中未发生明显的治疗不良反应。推测其发生与APG促创面miRNAs表达改变相关。