新型IRE1-XBP1抑制物逆转ER+乳腺癌内分泌治疗耐药机理的研究

The Ire1/Xbp-1 arm plays a critical role in the development of estrogen independent and anti-estrogen therapy resistant breast cancer and that Ire1/Xbp-1 axis can be targeted for treatment of anti-estrogen resistant breast cancer. Our studies will follow the Specific Aims below: Take real-time RT-PCR, Western blot and shRNA to test the hypothesis that the Ire1/Xbp-1 axis critically contributes to estrogen receptor-independent growth and endocrine resistance; take IHC to determine the predictive value of XBP1(S) on endocrine therapy's Curative Effect; and test the effect of Ire1/Xbp-1 axis inhibitor in anti-estrogen therapy resistant breast cancer in vitro and in vivo.

IRE1-XBP1剪切，XBP1(S)表达及细胞核内转运增强是PI3K通路导致ER+乳腺癌内分泌治疗耐药的关键途径和具体分子机制之一。本项目拟通过：（1）Real-time RT-PCR、shRNA干扰等技术明确XBP1(S)在PI3K通路导致ER+乳腺癌内分泌治疗耐药中的关键作用；（2）免疫组化比较内分泌治疗不同转归乳腺癌组织中XBP1(S)表达水平及细胞亚结构定位等的差异，评估其对内分泌治疗转归的预测价值；（3）体外细胞系及原代细胞中验证新型IRE1-XBP1抑制物（#LTR 1174）逆转ER+乳腺癌内分泌治疗耐药的价值；（4）验证#LTR 1174与内分泌药物在ER+乳腺癌移植瘤裸鼠体内的联合抗肿瘤作用。为临床逆转ER+乳腺癌内分泌治疗耐药提供新靶点，从而在提高内分泌治疗疗效方面取得突破。

目的：越来越多研究认为细胞内质网内的未折叠蛋白反应（UPR）与乳腺癌治疗耐药有关，而有报道他莫昔芬可引起UPR产生内质网应激使得下游xbp1s增加，本课题即研究xbp1s在ER+乳腺癌他莫昔芬治疗耐药中的角色，探讨ER+乳腺癌在治疗过程中出现内分泌耐药的可能机制，并研究新型的IRE1-XBP1抑制剂是否可以在ER+乳腺癌他莫昔芬耐药中起到辅助治疗作用。.方法：（1）低浓度诱导法创建mcf-7他莫昔芬耐药细胞株 。（2）使用real-time PCR、western blot方法验证耐药细胞株中xbp1s、p-IRE1、IRE1分子的变化。（3）使用RT-PCR法验证新型IRE1-XBP1抑制剂的作用。（4）使用MTT、裸鼠实验、免疫组化方法验证新型IRE1-XBP1抑制剂联合他莫昔芬对mcf-7体内体外耐药肿瘤的抑制作用。.结果：（1）低浓度诱导法创建的mcf-7耐药细胞株比不耐药细胞对他莫昔芬敏感性降低了1.7~2.4倍，且形态上有更多和更长的分支。（2）耐药细胞株中xbp1s mRNA较不耐药细胞增加2.26倍，p-IRE1、xbp1s蛋白也相应增多，TAM在短时间内即可引起xbp1s mRNA的升高。（3）新型IRE1-XBP1抑制剂可以阻断内质网应激引起的xbp1s mRNA增多。（4） 新型IRE1-XBP1抑制剂联合TAM无论体内体外均可协同TAM增加对耐药肿瘤细胞的抑制作用。.结论：他莫昔芬引起的内质网应激反应导致的IRE1-XBP1系统增强而产生的下游xbp1s增加，可能是ER+乳腺癌在他莫昔芬治疗过程中产生耐药的原因之一，而阻断该系统的新型IRE1-XBP1抑制剂可以协同他莫昔芬对耐药肿瘤的抑制作用，为ER+他莫昔芬耐药乳腺癌治疗提供了新的思路。