Nogo-B shRNA慢病毒抑制恶性胶质瘤微血管生成的作用及分子机制研究

最新研究表明中枢髓鞘源性抑制蛋白Nogo-B对血管内皮细胞具有VEGF样趋化修复作用。课题组前期分离培养了人胶质瘤微血管内皮细胞，发现Nogo-B的表达与肿瘤恶性度成正相关，提示Nogo-B可能参与了胶质瘤的血管生成与恶性侵袭。本研究中我们将对已有的100例胶质瘤样本及其对照进行分析，进一步明确Nogo-B在胶质瘤血管内皮细胞表达水平及与胶质瘤恶性程度和预后的相关性；建立稳定表达Nogo-B小干扰RNA的脑血管内皮细胞系，检测Nogo-B对血管内皮细胞的生物学作用；利用酵母双杂交和血管生成信号转导芯片技术探明Nogo-B调节恶性胶质瘤微血管生成的分子机制；利用 Nogo-B shRNA慢病毒系统探讨以Nogo-B为靶点抗肿瘤血管生成治疗胶质瘤的可行性。研究结果可望为恶性胶质瘤的治疗提供新的靶点和新的途径。

近年的研究表明，中枢髓鞘源性抑制蛋白Nogo-B对血管内皮细胞具有VEGF样趋化修复作用。本课题组发现胶质瘤血管内皮细胞中Nogo-B的表达较癌旁脑组织的血管内皮细胞中降低，提示Nogo-B可能参与了胶质瘤的血管生成，可能与胶质瘤的进展相关。.本研究中我们建立了稳定表达Nogo-B小干扰RNA的HUVEC血管内皮细胞系，检测了Nogo-B对血管内皮细胞的生物学作用；采用经典的肿瘤细胞和血管内皮细胞共同接种的方法，研究了血管内皮细胞中Nogo-B下调对胶质瘤生长的影响；利用蛋白质芯片与经典的分子生物学技术相结合探讨了Nogo-B调控新生血管形成的分子机制；深入探讨了以Nogo-B为靶点抗肿瘤血管生成治疗胶质瘤的可行性。.研究结果显示，Nogo-B在体外虽然可以促进血管内皮细胞生长和迁移，但显著抑制其形成官腔结构。体内研究结果证实，在肿瘤血管内皮细胞中下调Nogo-B的表达可以明显促进肿瘤血管形成，促进胶质瘤在体内的生长。这些结果提示：Nogo-B可能成为利用抗肿瘤血管生成治疗胶质瘤的新靶点。随后的研究中，我们还将肝癌细胞和血管内皮细胞共同接种实验动物，研究了血管内皮细胞中Nogo-B下调对肝癌生长的影响，取得了与胶质瘤一致的结果。这提示我们以Nogo-B为靶点的抗血管治疗可能拓展到多种实体瘤。.在机制研究方面，通过蛋白组学筛选和分子生物学验证，我们发现Nogo-B可以显著下调具有促进血管生成作用的VEGF和TSP1的表达，同时上调具有抑制血管生成作用的TGF、TNC和FN的表达，虽然具体的机制尚待进一步阐明，但Nogo-B通过调控多种血管生成的重要分子的表达，进而调控肿瘤血管生成，为肿瘤血管生成的研究提供了新的思路。后续研究中，为了检测向血管内皮细胞外源导入Nogo-B是否影响正常组织中血管内皮细胞的生物学功能，我们构建的过度表达Nogo-B的血管内皮细胞系。功能研究证实，在正常血管内皮细胞中外源导入Nogo-B并不影响，血管内皮细胞的生长和迁移。这一结果提示，外源导入Nogo-B抑制肿瘤血管生成和肿瘤生长时，对正常血管内皮细胞没有显著的副作用。