乳腺癌中RNAi对线粒体DNA拷贝量的影响

乳腺癌是危害女性健康的主要恶性肿瘤之一，线粒体DNA（mtDNA）作为核外唯一的遗传物质，已被证实与其发生与发展有关。本课题组在前期研究中已经发现乳腺癌中mtDNA拷贝量以及mtDNA Cyt-b表达的变化情况。为进一步探讨mtDNA与乳腺癌发生的关系，本课题拟对乳腺癌组织中mtDNA编码区的Cyt-b进行基因测序，分析该基因多态性与乳腺癌发生的相关性，寻找影响疾病发生的特异性突变位点；进而应用RNA干扰技术在细胞培养中观察mtDNA拷贝量的变化，以此阐明该突变位点在乳腺癌发生中的作用并提供一定的实验依据。将mtDNA Cyt-b的多态性与乳腺癌发生，以及应用RNA干扰技术检测其对mtDNA拷贝量变化的影响进行联合研究尚属首次。实验结果将为研究乳腺癌乃至肿瘤的发生机制提供可靠的实验依据，并为临床研究和开发新的乳腺癌的诊断和治疗方法提供理论依据。

乳腺癌是危害女性健康的主要恶性肿瘤之一。mtDNA作为核外唯一的遗传物质，已被证实与乳腺癌的发生与发展有关。本课题首次以乳腺癌为研究对象寻找mtDNA Cyt-b特异性突变位点，结果发现Cyt-b基因区有6个高突变发生率位点，即：A15326G、C14766T、G15301A、G15043A、T14783C、C15402T，其中A15326G突变率最高；同时检测了ATPase6基因区并发现3个高突变发生率位点，即：C8673T、A8729G、T8955C，其中C8673T突变率最高。随后我们以mtDNA Cyt-b高突变位点A15326G为切入点，以整段带有该突变位点的Cyt-b区为靶基因，构建针对靶基因的miRNA干扰载体，将干扰载体转染入BCAP-37细胞进行干扰效果评价，结果发现在干扰载体瞬时转染BCAP-37细胞48小时后，对收集样品qPCR检测mtDNA拷贝量相关基因的表达，结果其具有0.28的沉默效率。此项结果表明利用RNA干扰技术可以改变乳腺癌细胞mtDNA拷贝量，对其具有一定减效表达效应，表明mtDNA Cyt-b突变位点A15326G在乳腺癌发生过程中起到一定的作用。此项研究在国内外尚属首次。同时本课题研究还发现了乳腺癌细胞线粒体抗氧化系统MnSOD基因和蛋白表达下降，以及呼吸链相关酶细胞色素C还原酶升高与临床病理参数的关系。这些研究结果可为乳腺癌的发生提供新的理论依据，也可对乳腺癌的早期诊断、基因治疗、预后判定等提供一种新的参考指标。