瘦素（leptin）对黄颡鱼卵巢发育的影响及机理

瘦素（leptin）是脂肪组织分泌的重要激素，其氨基酸序列及mRNA基因序列在一些鱼类已被阐明，但它在鱼类的生物学功能研究极少，也缺乏瘦素对鱼类卵巢发育影响及机理的研究报道。本课题拟运用繁殖营养学、生物化学、鱼类发育及繁殖生物学、细胞离体培养和分子生物学等的基础理论和实验手段，以我国淡水名贵养殖鱼类- - 黄颡鱼为对象，研究不同发育阶段黄颡鱼瘦素的组织表达水平与脂类代谢和卵巢发育的关系；探讨外源瘦素对黄颡鱼脂类代谢和卵巢发育成熟的影响、以及对下丘脑-垂体-性腺轴的影响；通过离体实验研究瘦素影响不同阶段卵巢发育的神经内分泌基础。本课题将首次从下丘脑-垂体-性腺轴变化及与脂类代谢关系两方面阐明瘦素对黄颡鱼卵巢发育的影响及机理，拓展鱼类发育及繁殖生物学的研究领域，为实现鱼类卵巢发育的有效调控提供新的研究思路，同时有望为鱼类人工繁殖新方法的建立提供策略，为全面揭示鱼类瘦素的生物学功能奠定基础。

克隆得到了黄颡鱼与性腺发育、脂类代谢及其调控有关的关键基因的cDNA全序列或部分序列，这些基因包括：leptin、leptin receptor、CPT1A、CPT1B、PPARalpha、PPARgamma、SREBP-1、G6PD、6PGD、FAS、ACCa、ACCb、LPL、thyroid hormone（TH）、TH receptor等。并对这些基因的分子特征进行了分析，探讨了这些基因在不同物种间的进化关系，确定了这些基因mRNA的组织表达模式。.研究了黄颡鱼卵巢发育过程中卵巢组织学的变化，以及脂类代谢相关指标与leptin及其受体基因表达水平的关系。结果表明：CPT-1的活性在第III期达到最大，其他各期均无显著性差异；LPL的活性则随着卵巢的发育下降，第V期降到最小值，到第VI期又上升；FAS活性则随着卵巢的发育一直上升，到第IV期达到峰值。mRNA结果表明，LPL、FAS和CPT 1mRNA水平在第VI期显著增加。肝脏和脑组织中leptin基因的mRNA水平在第III期达到峰值。相关分析的结果表明：在肝脏，leptin基因表达水平与脂类代谢相关酶（LPL，CPT I，FAS）基因表达水平及CPT I活性呈正相关；在肠系膜组织中，leptin及leptin receptor 基因的mRNA水平均与脂蛋白酯酶的表达水平呈负相关；在脑组织中leptin及其受体基因表达水平与FAS表达水平呈负相关；而在卵巢，leptin及leptin receptor基因表达水平与LPL及CPT I的表达水平呈正相关。.研究了脑腔注射Leptin对黄颡鱼脂类代谢的影响。注射外源性leptin后黄颡鱼肝体比无显著性差异。黄颡鱼肝脏脂肪含量随着leptin注射剂量的增加而下降。在注射外源性leptin后48小时，G6PD、6PGD、MDH、ICDH及FAS的活性均随注射leptin剂量的增加而下降，但是CPT-1 酶活性随注射leptin注射剂量的增加而有所上升。.探讨了leptin对离体培养脑垂体和卵巢滤泡中相关激素分泌水平的影响，在72h取样。结果表明：随着leptin孵育浓度的增加，脑垂体孵育液中卵泡刺激素和黄体激素的浓度也呈增加的趋势。随着leptin浓度的增加，卵巢孵育液中孕酮和雌二醇浓度都显著增加。表明leptin能通过下丘脑-垂体-性腺轴影响黄颡鱼卵巢的发育。