基于数据挖掘和代谢组学技术的小青龙汤证证本质研究

目前对小青龙汤证本质的研究多在宏观层面上，且没有形成统一的认识和标准。对于微观层面上的研究与认识还很欠缺，不能与宏观认识形成对接，数据挖掘和代谢组学技术的应用尚未见报道。本课题首次应用数据挖掘和代谢组学技术对小青龙汤证的本质进行研究。首先收集小青龙汤医案及小青龙汤证的实验研究资料，建立数据库，运用数据挖掘技术进行数据分析，总结小青龙汤证本质的研究情况，揭示其病因、症状等的分布规律及主要辨证指标。再进行代谢组学研究，测定小青龙汤证大鼠尿液、血浆与肺、脾、肾组织的NMR、GC-MS和LC-MS指纹图谱，将数据进行PCA和PLA-DA分析，找出与小青龙汤证密切相关的特征化合物，归纳出小青龙汤证的代谢特征。最后将宏观与微观结果相结合，从中西医结合角度分析探讨二者的异同和相关性，确定小青龙汤证的证候实质，为临床使用小青龙汤提供辨证标准与生物学依据。

【摘要】目的：应用数据挖掘和代谢组学技术对小青龙汤证本质进行研究。方法：（1）收集古今小青龙汤医案及相关资料，建立数据库，运用数据挖掘技术分析小青龙汤证主要疾病、症状、病性等，探讨小青龙汤证的证候特点和诊治规律，并依此建立小青龙汤证临床疾病模型；（2）应用代谢组学技术测定小青龙汤证大鼠血液、尿液及肺、脾、肾中的小分子代谢物，观察代谢产物的变化，找到小青龙汤证的特征小分子代谢物，确定小青龙汤证的证候本质。结果：（1）小青龙汤证病种主要是呼吸系统疾病，如慢性支气管炎、支气管哮喘、上呼吸道感染等；主症以咳嗽、咳喘为主，次症多见恶寒、胸闷、纳差、少神、发热等；舌色以淡为主，苔色以白为主；脉多见弦、滑、浮、沉、细、数、紧、缓，可单见亦可复合见之；病性以寒为主，兼见热、虚；病理因素主要为饮兼见痰、瘀；病位以肺多见，也可见胃、脾、肾、肝等。（2）NMR：血中小分子标志物为肌酸、3-羟基丁酸、牛磺酸、天冬氨酸、瓜氨酸、谷氨酰胺等，尿中肌酸酐、胍基乙酸、三甲胺、牛磺酸、尿囊素等，肺中亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、精氨酸、组氨酸、丙氨酸和牛磺酸；GC-MS：血中小分子标志物为乳酸、3-羟基丁酸、尿素、丁二酸、甘氨酸、丝氨酸、赖氨酸、花生四烯酸、戊二酸、吡喃半乳糖苷、山梨醇、缬氨酸，尿中甘氨酸、葡萄糖、肌醇、脯氨酸、延胡索酸、丙氨酸、尿素，肺中棕榈酸、硬脂酸、延胡索酸、肌醇、2-丁酮酸、甘氨酸，肾中乳酸、丙氨酸、尿素、亮氨酸、缬氨酸、甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、天冬氨酸、脯氨酸；LC-MS：血中小分子标志物为组氨酸、溶血性磷脂酰乙醇、胺胆碱、赖氨酸、卵磷脂，尿中氨基酸、葡萄糖苷酸、4-羟苯丙酮酸，肺中亚精胺、精胺、谷氨酰基-异亮氨酸、鸟苷，脾中甘氨酸、苯基丙氨酸、脑磷脂、磷酸胍乙酸盐，肾中4-羟苯丙酮酸、亚油酸、3,5-二溴-L-酪氨酸、氨基酸。结论：（1）小青龙汤证病种、症状方面以呼吸系统为主，舌脉也与前人的研究无明显的差别；证候方面，从病性、病理因素、病位三方面总结归纳为寒饮犯肺，可具体细分为外寒引动伏饮和外寒夹新饮。（2）代谢组学的三种技术方法虽有差异，但与小青龙汤证密切相关的特征小分子化合物基本一致，总体上都反映出小青龙汤证引起机体变化主要有三个方面：能量代谢、炎症反应和免疫功能。（3）小青龙汤证宏观证候特点与微观特征小分子化合物变化内外一致，相互对应。