结直肠癌细胞外基质的动态变化特征及其对上皮间质转化的作用研究

采集息肉/结直肠癌及正常结肠组织,Dispase脱细胞处理,Masson/Van Gieson/Weigert染色/电镜分析ECM结构动态变化；Western blot/免疫组化/Ellisa分析ECM分子组成动态变化;多维液相色谱/MALDI-TOF-MS鉴定ECM的差异表达蛋白，Western blot验证;评价ECM变化与临床分期/肿瘤分化程度/预后的相关性；HT29/LOVO/人成纤维细胞/HUVEC与ECM共培养,MTT法/流式细胞/FATIM技术分析细胞增殖迁移能力,基因芯片检测差异基因,分析ECM对癌细胞/间质细胞的作用和机制;建立可视化裸鼠荷瘤模型,活体荧光显像技术检测脱细胞肿瘤ECM对结直肠癌细胞成瘤/侵润/转移/血管生成能力的影响; LIM1863细胞与脱细胞ECM共培养,检测E-cadherin和整合素αvβ6表达，鉴定EMT,PCR Array鉴定EMT相关基因.

肿瘤的发生和转移与癌细胞所处的微环境有着密切关系，而细胞外基质（extracellular matrix, ECM）是肿瘤微环境的主要部分。本课题将结肠息肉、I-IV期结直肠癌及相应正常结肠组织各30例脱细胞后制得细胞外基质，通过观察息肉、不同分期结直肠癌和不同分化程度结直肠癌的ECM中胶原纤维、弹力纤维的构型，孔径分布和大小，胶原排列等来明确ECM结构的动态变化特征，应用western blot、免疫组化等方法分析几种主要ECM蛋白的表达及分布情况，将ECM与癌细胞共培养后采用western blot方法检测E-cadherin和整合素αvβ6的表达，分析不同分期结直肠癌和不同分化程度结直肠癌的ECM对上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition ，EMT）的影响。 . 本课题明确了ECM在息肉、不同分期结直肠癌和不同分化程度结直肠癌中的变化规律以及ECM对肿瘤细胞成瘤能力、侵袭转移的影响，明确了ECM对EMT的作用和分子机制。本课题结果提示随着肿瘤分期的增高和分化程度的降低，ECM发生了动态变化，包括胶原纤维增多，孔隙率增大，孔径增大，癌细胞增殖周期缩短，迁移能力更强，更易发生EMT，从而造成癌细胞的转移和病人的预后不良。本课题的结果表明:随着肿瘤分期的增高和分化程度的降低，ECM也向更有利于癌细胞增殖，更易于发生EMT、更易于癌细胞侵袭转移的方向发生转变，从而造成病人的预后不良。