从Th17/IL-17通路探讨补肾抗衰片干预早期动脉粥样硬化的机制

Atherosclerosis (AS) is an autoimmune disease, a variety of immune cells (eg macrophages, T cells) and cytokines involved this diseases of hanpen and the development. Th17 and IL-17 have the effect of promotes atherosclerosis. So, the study of role of Th17 / IL-17 pathways is likely to gain greater treatment benefits, interve in this pathway, may be the new hot topics in the study of prevention and treatment atherosclerosis. Preliminary studies show that BuShenKangShuai tablets has the function cure atherosclerosis by cutting T-bet, IFN-gamma reduce Th1 expression, cutting ROR-gamma T, IL-17 reduce Th17 expression in the AS model.This study use BuShenKangShuai tablets as drug intervention, immunologic mechanism use an entry point, by in vitro and in vivo experiments, detection target is many link, detection method is more level, intervention time is multiple, to clear the correlation between Th17 and atherosclerosis, to dynamic observe the role of Th17/IL-17 pathways in atherosclerosis, to clarify the molecular mechanism of BuShenKangShuai tablets treatment atherosclerosis, reveal its pharmacological effects, and provide a scientific basis for confirmation.

动脉粥样硬化（atherosclerosis, AS）是多种免疫细胞（如巨噬细胞、T细胞）和细胞因子参与的自身免疫病，其中Th17及IL-17具有促进AS形成的作用，因此，研究Th17/IL-17通路在AS中的作用有可能获得更大的治疗益处，干预该通路的研究成为防治AS领域研究的新热点。前期临床研究表明，补肾抗衰片治疗动脉粥样硬化性疾病疗效肯定，预实验提示，其可能通过下调T-bet、IFN-γ减少Th1的表达，下调RORγt、IL-17减少Th17在AS模型中的表达起到抗AS的效应。本研究以免疫机制为切入点，通过离体和在体实验，用补肾抗衰片进行干预，在干预靶点的多环节、检测的多水平、干预的多时点上，明确Th17与AS的相关性、动态观察Th17/IL-17通路在AS形成、发展过程中的作用，进而阐明补肾抗衰片治疗AS的分子机制，为进一步深入揭示补肾抗衰片的药理作用及其起效靶点的确认提供科学依据。

越来越多的证据表明，动脉粥样硬化（atherosclerosis, AS）是一种慢性炎症性的白身免疫性疾病。AS的病理过程主要包括通过招募和活化单核/巨噬系统对沉积在动脉壁中的氧化修饰的脂质（主要是氧化修饰的低密度脂蛋白）产生固有免疫应答，随后又发生由不同抗原特异性的T淋巴细胞参与的适应性免疫应答。多种免疫细胞和炎症因了在AS的发生、发展过程中起着重要作用，其中最主要的是Th17细胞、Treg细胞及其分泌的细胞因了。本研究以免疫炎症机制为切入点，在体实验方面，通过高脂饮食喂养ApoE-/-小鼠复制动脉粥样硬化模型，以临床确有疗效的补肾抗衰片进行干预，以阿托伐他作为西药对照，于不同时间点进行取材，从脂代谢、病理形态学角度观察补肾抗衰片干预动脉粥样的效应，采用流式细胞术检测Th17细胞、Treg细胞的数量，RT-PCR法检测Foxp3mRNA、RORrtmRNA的表达水平，高通量液相蛋白芯片检测Th17、Treg细胞分泌蛋白表达。研究结果表明，Th17/Treg失衡与AS发生发展密切相关，补肾抗衰片可以上调Treg表达，同时Th17降低水平，有效改变Th17/Treg平衡状态，从而抑制AS形成。在离体实验方面，采用网络药理学方法筛选补肾抗衰片有效中药单体--槲皮素作为干预药物，体外培养EA.hy926细胞株，建立IL-17诱导的内皮细胞炎症模型，以不同剂量的槲皮素进行干预，筛选槲皮素干预的最佳浓度范围。体外培养人单核细胞株THP-1，建立单核-内皮细胞粘附模型，免疫荧光法检测槲皮素抑制单核-内皮细胞粘附的效应，检测NF-κBP65核转移情况、检测NF-κBP65、p-NF-κBP65、IκBα、p-IκBα蛋白表达以及下游炎症因子ICAM-1、VCAM-1、MCP-1蛋白及mRNA表达，探讨槲皮素是否通过调节NF-κB及下游相关炎症因子的表达发挥其抗AS的作用。研究结果表明，补肾抗衰片具有抗AS的效应，其可能的机制。其有效单体槲皮素，可以抑制单核-内皮细胞的粘附效应，可以通过调节NF-κB及下游相关炎症因子的表达，达到抗AS的作用。本研究为进一步深入揭示补肾抗衰片的药理作用及其起效靶点的确认提供了科学依据。